[發明專利]金黃色葡萄球菌5型和8型莢膜多糖的純化

有效

• 申請號: 201080060554.0
• 申請日: 2010-11-01
• 公開（公告）號: CN102971009A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: P·科斯塔蒂諾;M·R·羅馬諾;F·伯爾蒂
• 申請（專利權）人: 諾華有限公司
• 主分類號: A61K39/085
• 分類號: A61K39/085;A61K39/385
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 余穎

1.一種從金黃色葡萄球菌(S.aureus)5型和8型細胞中釋放莢膜多糖的方法，所述方法包括酸處理細胞步驟。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞是金黃色葡萄球菌5型細胞。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞是金黃色葡萄球菌8型細胞。

4.如權利要求1-3中任一項所述的方法，其特征在于，所述細胞采用濕細胞體的形式或者懸浮在液體培養基中。

5.如權利要求1-4中任一項所述的方法，其特征在于，所述酸處理用用乙酸進行。

6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于，所述酸處理產生O-乙酰化程度為60-100％的莢膜多糖。

7.如權利要求1-6中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括中和步驟。

8.如權利要求1-7中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括細胞離心和收集含多糖上清液的步驟。

9.一種從金黃色葡萄球菌5型或8型細胞中純化莢膜多糖的工藝，所述方法包括權利要求1-8中任一項所述的方法。

10.如權利要求9所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括用DNase和/或RNase處理莢膜多糖的步驟。

11.如根據權利要求9或10所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括用變溶菌素處理莢膜多糖的步驟。

12.如權利要求9-11中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括滲濾步驟。

13.如權利要求12的工藝，其特征在于，所述滲濾是切向流過濾。

14.如權利要求9-13中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括陰離子交換色譜步驟。

15.如權利要求9-14中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括凝膠過濾步驟。

16.如權利要求9-15中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括多糖濃縮步驟。

17.如權利要求9-16中任一項所述的工藝，其特征在于，所述純化的多糖分子量是2-3500kDa。

18.如權利要求9-17中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括解聚純化的多糖形成寡糖的步驟。

19.如權利要求9-18中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括無菌過濾步驟。

20.如權利要求9-19中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝提供一種包含多糖和肽聚糖污染水平相對于多糖總重小于5％重量的組合物。

21.如權利要求20的工藝，其特征在于，所述肽聚糖污染水平是大約2％。

22.如權利要求9-21中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝提供一個包含多糖和蛋白質污染水平相對于多糖總重小于5％重量的組合物。

23.如權利要求9-22中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝提供一個包含多糖和核酸污染水平相對于多糖總重小于1％重量的組合物。

24.如權利要求9-23中任一項所述的工藝，其特征在于，所述工藝還包括與載體分子偶聯的步驟。

25.一個包含金黃色葡萄球菌5型或8型莢膜多糖、可根據權利要求9-23中任一項所述工藝獲得的組合物，或者可根據權利要求24所述工藝獲得的偶聯物。

26.如權利要求25所述的組合物，其特征在于，所述組合物還包含一種或多種選自下組的金黃色葡萄球菌蛋白質抗原：clfA抗原；clfB抗原；sdrE2抗原；sdrC抗原；sasF抗原；emp抗原；sdrD抗原；spa抗原；esaC抗原；esxA抗原；esxB抗原；sta006抗原；isdC抗原；Hla抗原；sta011抗原；isdA抗原；isdB抗原；和sta073抗原。

27.如權利要求26所述的組合物，其特征在于，所述一種或多種金黃色葡萄球菌蛋白質抗原選自：esxA抗原；esxB抗原；sta006抗原；Hla抗原；sta011抗原；和sta073抗原。

28.如權利要求27所述的組合物，其特征在于，所述組合物包含下述組合(1)-(10)之一所述的金黃色葡萄球菌蛋白質抗原：

(1)esxA抗原，esxB抗原，sta006抗原和Hla抗原；

(2)esxA抗原，esxB抗原，sta006抗原和sta011抗原；

(3)esxA抗原，esxB抗原和sta011抗原；

(4)esxA抗原，esxB抗原，Hla抗原，sta006抗原和sta011抗原；

(5)esxA抗原，esxB抗原和Hla抗原；

(6)Hla抗原，sta006抗原和sta011抗原；

(7)esxA抗原和esxB抗原；

(8)esxA抗原，esxB抗原和sta006抗原；

(9)esxA抗原，esxB抗原，sta011抗原和sta073抗原；和

(10)sta006抗原和sta011抗原。