[發明專利]結合內外校準法的分析物定量多重微陣列

有效

• 申請號: 201080060201.0
• 申請日: 2010-10-29
• 公開（公告）號: CN102713620A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 彼得·李;珍妮弗·漢森;凱特·史密斯
• 申請（專利權）人: SQI診斷系統有限責任公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;C40B30/00;G01N33/543;G01N33/564;C40B30/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王瑩;張晶

技術領域

本發明涉及用于分析物定量的多重微陣列和方法，尤其是，本發明涉及改進的方法，該方法針對內部參考標準化曲線和從已知參考標準獲得的標準化曲線來對分析物濃度進行標準化。本發明還涉及對用于確定正?；瘶藴屎涂刂频闹眯哦冗M行同時測量的方法和校驗。

背景技術

生物標記是可被測量和評價的特性，作為有機體的生物狀態的指示劑。在醫學中，生物標記可以是外生的物質，其被引入到患者體內以檢查生物過程，比如器官功能及生物化學機能和路徑。生物標記也可以是從患者處獲得的生物分子，比如蛋白質或核酸，其表示具體的疾病狀態或者對藥物治療的反應。這樣的生物化學生物標記在新藥的發現和研發中也是特別有用的。在這些藥物的早期臨床研究期間，合適的生物標記的量化可以潛在地幫助研究人員更快速地識別最有希望的候選藥物，因此精簡了藥物開發過程。與疾病有關的生物標記還可用于疾病的診斷和預后，并用作對療效的測定。因此，這對于識別和驗證新的生物標記（其可以用于評估患者的健康和/或對治療介入的響應）以及提供用于已知生物標記的準確且可復制的確定的方法是非常重要的。

生物標記分析高度地依賴于諸如抗體的試劑的完整性，該試劑本身是從生物源得到的并因此可能受到質量控制和穩定性因素的影響。在許多生物標記分析過程中使用了未核準的標準，比如重組蛋白質和替代矩陣，從而導出校準曲線。因此，需要進行平行研究，其中對替代矩陣中組成的一定范圍的校準標準濃度的分析的響應是與對一系列患者樣本稀釋液的分析的響應相當的。稀釋線性度也可能存在問題，因為抗體和配體結合的親和力可以在不同的介質中有很大變化。生物標記分析的開發和鑒定的目的是為了開發用于臨床獲益的分析。

基于目標抗原的抗體的結合特異性，諸如酶聯免疫吸附測定（“ELISA”）的免疫分析在本領域中是眾所周知的（參見例如，Engvall等人，免疫化學，1971年，8卷，第871頁；Ljunggren等人，免疫方法雜志，1987年，88卷，第104頁；Kemeny等人，當代免疫學，1986年，7卷，第67頁）。免疫分析對于識別新的生物化學生物標記，比如蛋白質或核酸，以及量化已知的生物標記是非常有用的，因為可針對特定的生物標記而產生抗體。

通過免疫分析定量確定生物標記的方法的實例在本領域中是已知的。參見例如，Hawkes等人，生物化學分析，1982年，119卷，第142-147頁，和Tobin和Gordon，免疫方法雜志，1984年，72卷，第313-340頁，和Gordon等人的序號為5,486,452、名稱為“用于免疫分析的裝置和工具”的美國專利。

以前所采用的免疫分析方法易于受到限制，因為其在每個測試周期中只能在單個反應容器內檢測一個目標分析物。已經通過將探針分子（例如抗體）附著至固體基底（例如盤上的珠子或孔）、然后將測試樣本、緩沖液和試劑溶液布滿固體基底進行了嘗試，以減少完成每個測試周期的時間，并增加在每個周期中所完成的測試的量。

微陣列是一種裝置，其中大量（例如數百至數千）的比如DNA和蛋白質的生物分子的樣本被附著或固定于適合的未反應基底表面，比如塑料（例如聚丙烯、聚苯乙烯、環烯）、硅樹脂和玻璃。如果基底表面相對平直，生物分子可以被“印刷”到表面上，由此通過應用含有已知濃度生物分子的已知體積的“測定點位”的緩沖液來實施印刷。使用固定于已知基底或基底表面上的已知位置的生物分子，基底表面可以被暴露于生物化學/化學試劑，以用于檢測、定性和定量分析的目的。例如，微陣列可以用于實施ELISA型免疫分析，其中固定于基底的生物分子為抗體，然后基底表面被暴露于含有抗原（其上可結合抗體）的測試溶液。然后可用緩沖溶液布滿基底表面并使其暴露于第二抗體，該第二抗體要么與可檢測標簽（例如放射性標簽或熒光染料）配對，要么與酶（該酶對反應進行催化，對該反應的反應產物進行染色且因此可被檢測到）配對。因此微陣列容許大量樣本的高通量分析。同時，已經開發了計算機軟件程序來分析從微陣列中產生的大量數據。

微陣列的大量實例和對由微陣列所提供的數據進行處理的方法在本領域中是已知的。參見例如Ghandour等人的序號為6,516,276、名稱為“用于對來自生物分子陣列的數據進行分析的方法和設備”的美國專利，Shah的序號為6,916,621、名稱為“用于基于陣列的比較結合測定的方法”的美國專利，和Minor的序號為7,072,806、名稱為“用于橫跨多個平臺進行數據值比較的方法和系統”的美國專利。