[發明專利]用于檢測致癌融合蛋白的鄰近介導試驗有效

申請號：	201080058150.8	申請日：	2010-10-20
公開（公告）號：	CN102667478B	公開（公告）日：	2018-06-01
發明（設計）人：	S·辛格;X·劉	申請（專利權）人：	雀巢產品技術援助有限公司
主分類號：	G01N33/50	分類號：	G01N33/50
代理公司：	北京市中咨律師事務所 11247	代理人：	胡志君;黃革生
地址：	瑞士***	國省代碼：	瑞士;CH
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摘要：
搜索關鍵詞：	融合蛋白致癌活化狀態酶聯免疫吸附實驗檢測生物樣品信號轉導分子腫瘤組織多重性高通量靈敏度微陣列介導抗體全血測量鄰近檢測試驗聯合
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【權利要求書】：

1.測定樣品中致癌融合蛋白的表達和/或活化水平的試劑的用途，用于制備試劑盒，所述試劑盒用在選擇用于治療癌癥的合適抗癌藥的方法中，所述方法包括：

(a)給予抗癌藥之后或用抗癌藥孵育前分離癌細胞；

(b)裂解所述分離細胞產生細胞提取物，其中所述分離細胞在裂解前未清洗以產生細胞提取物；

(c)將細胞提取物與對第一全長蛋白的第一結構域特異的第一結合部分在適于將所述細胞提取物中存在的第一全長蛋白轉變為含所述第一全長蛋白和所述第一結合部分的復合物的條件下接觸，其中所述第一全長蛋白的第一結構域在對應的致癌融合蛋白中不存在，所述融合蛋白包含與第二不同全長蛋白的第一結構域融合的第一全長蛋白的第二不同結構域；

(d)將步驟(c)中的復合物從細胞提取物中移除以形成不含所述第一全長蛋白的細胞提取物；

(e)將步驟(d)中的細胞提取物與第二結合部分、第三結合部分、和第四結合部分在適于將所述細胞提取物中存在的致癌融合蛋白轉變為含所述致癌融合蛋白和所述第二結合部分、第三結合部分、和第四結合部分的復合物的條件下接觸，

其中所述第二結合部分特異于第一全長蛋白的第二不同結構域，其中所述第二結合部分被限制在可尋址陣列的固體支持物，

其中所述第三結合部分用輔助部分標記并對下述之一特異：(i)所述第二不同全長蛋白的第一結構域；(ii)所述第一全長蛋白的第二不同結構域；或(iii)所述第一全長蛋白的第二不同結構域和所述第二不同全長蛋白的第一結構域的融合位置，

其中所述第四結合部分用信號放大對的第一元件標記，且對所述第二不同全長蛋白的第一結構域特異，和

其中所述輔助部分生成傳至信號放大對的第一元件并與之反應的氧化劑；

(f)用信號放大對的第二元件孵育步驟(e)中的復合物，生成放大的信號；

(g)檢測信號放大對第一和第二元件產生的放大信號，由此測量所述細胞提取物中致癌融合蛋白的表達和/或活化水平；和

(h)通過對比所述致癌融合蛋白測得的表達和/或活化水平與沒有所述抗癌藥時產生的參比水平和/或活化分布，測定所述抗癌藥適合或是不適合用于治療癌癥。

2.測定樣品中致癌融合蛋白的表達和/或活化水平的試劑的用途，用于制備試劑盒，所述試劑盒用在鑒定癌癥對抗癌藥治療響應的方法中，所述方法包括：

(a)給予抗癌藥之后或用抗癌藥孵育前分離癌細胞；

(b)裂解所述分離細胞產生細胞提取物，其中所述分離細胞在裂解前未清洗以產生細胞提取物；