[發(fā)明專利]干細胞分化成為視網(wǎng)膜細胞的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080058099.0
• 申請日: 2010-10-06
• 公開（公告）號: CN102712900A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 樸圣燮;金志妍
• 申請（專利權(quán)）人: 首爾大學校產(chǎn)學協(xié)力團;金志妍
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/07;C12N5/02
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

1.使干細胞分化成為視網(wǎng)膜細胞的方法，其包括在含有以下成分的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)干細胞來源的視網(wǎng)膜祖細胞分化成為神經(jīng)視網(wǎng)膜祖細胞：IGF1R(胰島素樣生長因子-1受體)活化劑、BMP(骨形態(tài)發(fā)生蛋白)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑、FGF(成纖維細胞生長因子)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑和Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述視網(wǎng)膜祖細胞被培養(yǎng)1至30天以產(chǎn)生所述神經(jīng)視網(wǎng)膜祖細胞。

3.使干細胞分化成為視網(wǎng)膜細胞的方法，其包括在含有以下成分的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)干細胞來源的神經(jīng)視網(wǎng)膜祖細胞分化成為感光細胞前體細胞：IGF1R活化劑、Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑和Shh(音猬因子)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述神經(jīng)視網(wǎng)膜祖細胞被培養(yǎng)1至30天以產(chǎn)生所述感光細胞前體細胞。

5.使干細胞分化成為視網(wǎng)膜細胞的方法，其包括在含有以下成分的培養(yǎng)基中誘導(dǎo)干細胞來源的感光細胞前體細胞分化成為感光細胞：IGF1R活化劑、Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑、Shh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑和RA(視黃酸)。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述感光細胞前體細胞被培養(yǎng)1至60天以產(chǎn)生所述感光細胞。

7.誘導(dǎo)干細胞分化成為視網(wǎng)膜細胞的方法，其包括：

(a)在含有以下成分的培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細胞來源的視網(wǎng)膜祖細胞以使它們分化成為神經(jīng)視網(wǎng)膜祖細胞：IGF1R活化劑、BMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑、FGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑和Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑；

(b)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述神經(jīng)視網(wǎng)膜祖細胞以使它們分化成為感光細胞前體細胞，該培養(yǎng)基除了從其中去除BMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑和FGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑并向其中添加Shh信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑之外，與步驟(a)中的培養(yǎng)基相同；以及

(c)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述感光細胞前體細胞以使它們分化成為包括感光細胞在內(nèi)的視網(wǎng)膜細胞，該培養(yǎng)基除了向其中添加RA之外，與步驟(b)中的培養(yǎng)基相同。

8.如權(quán)利要求7所述的方法，其中步驟(a)、(b)和(c)分別進行以下時間：1至30天、1至30天和1至60天。

9.如權(quán)利要求7所述的方法，其中通過以下步驟獲得所述視網(wǎng)膜祖細胞：

(a')在含有以下成分的培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細胞以使它們分化成為懸浮聚集形式的眼區(qū)前體細胞：IGF1R活化劑、Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑和BMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑；以及

(b')在培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述懸浮聚集形式的眼區(qū)前體細胞以使它們分化成為視網(wǎng)膜祖細胞，該培養(yǎng)基除了再向其中添加FGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑之外，與步驟(a')中的培養(yǎng)基相同。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述步驟(a')和(b')分別進行1至30天和5至15天的時間。

11.如權(quán)利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述干細胞選自骨髓干細胞(BMS)、臍帶血干細胞、羊水干細胞、脂肪干細胞、視網(wǎng)膜干細胞(RSC)、視網(wǎng)膜內(nèi)米勒膠質(zhì)細胞、胚胎干細胞(ESC)、誘導(dǎo)型多能干細胞(iPSC)和體細胞核移植細胞(SCNT)。

12.如權(quán)利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述IGF1R活化劑是IGF-1或IGF-2。

13.如權(quán)利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)基含有濃度為0.01至100ng/ml的IGF1R活化劑。

14.如權(quán)利要求1、7和9中任一項所述的方法，其中所述BMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑選自頭蛋白、腱蛋白、扭曲原腸胚形成(Tsg)、cerberus、coco、gremlin、PRDC(與DNA和cerberus相關(guān)的蛋白)、DAN(在成神經(jīng)細胞瘤中差別篩選選出的基因aberrative)、dante、卵泡抑素、USAG-1(子宮敏感性相關(guān)基因1)、dorsomorphin、硬化蛋白及以上的組合。

15.如權(quán)利要求1、7和9中任一項所述的方法，其中所述培養(yǎng)基含有濃度為0.01至100ng/ml的BMP信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制劑。

16.如權(quán)利要求1、7和9中任一項所述的方法，其中所述FGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑活化劑活化FGFR?1c或FGFR?3c。