[發(fā)明專利]基于C-型凝集素結(jié)構(gòu)域的組合文庫(kù)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080056021.5
• 申請(qǐng)日: 2010-02-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102686727A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: M.維爾德;A.克雷茨-羅梅爾;K.鮑迪施;M.倫肖
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 阿納福公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C07K14/47
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 劉蕾;沙捷

1.一種組合多肽文庫(kù)，其包括下述多肽成員，所述多肽成員含有具有隨機(jī)化環(huán)區(qū)域的C-型凝集素結(jié)構(gòu)域(CTLD)，其中所述CTLD的環(huán)區(qū)域包括含有環(huán)1-4的環(huán)區(qū)段A(LSA)和含有環(huán)5的環(huán)區(qū)段B(LSB)，并且所述CTLD的環(huán)區(qū)域按照下述方案之一而被隨機(jī)化：

(a)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括在環(huán)1中至少一個(gè)氨基酸的插入以及環(huán)1內(nèi)至少五個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換；

(b)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括環(huán)1內(nèi)至少五個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換以及環(huán)2內(nèi)至少三個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換；

(c)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括環(huán)1內(nèi)至少七個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換以及在環(huán)4中的至少一個(gè)氨基酸插入；

(d)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括在環(huán)3中的至少一個(gè)氨基酸插入以及環(huán)3內(nèi)至少三個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換；

(e)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括將兩個(gè)環(huán)組合成單一環(huán)的修飾，其中兩個(gè)被組合的環(huán)為環(huán)3和環(huán)4；

(f)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括在環(huán)4中的至少一個(gè)氨基酸插入以及環(huán)4內(nèi)至少三個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換；

(g)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)和環(huán)區(qū)段B(LSB)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括環(huán)3中至少五個(gè)氨基酸殘基的隨機(jī)置換以及環(huán)5內(nèi)至少三個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換；

(h)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括在環(huán)3中的至少一個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換以及至少六個(gè)氨基酸的插入；

(i)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括下述的混合：(1)在環(huán)3中的至少六個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換，和(2)在環(huán)3中的至少六個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換和至少一個(gè)氨基酸插入；和

(j)在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中進(jìn)行氨基酸修飾，其中所述氨基酸修飾包括在CTLD的環(huán)區(qū)段A(LSA)中的四個(gè)環(huán)中的至少一個(gè)中或者環(huán)區(qū)段B(LSB)的環(huán)5中進(jìn)行是至少四個(gè)或更多個(gè)氨基酸插入。

2.如權(quán)利要求1所述的文庫(kù)，其中所述CTLD包括下述二級(jí)結(jié)構(gòu)：

(a)以β1、α1、α2、β2、β3、β4和β5的次序順序出現(xiàn)的五個(gè)β-鏈和兩個(gè)α-螺旋，所述β-鏈以兩個(gè)反平行β-折疊排列，一個(gè)由β1和β5組成，另一個(gè)由β2、β3和β4組成；

(b)至少兩個(gè)二硫鍵，一個(gè)連接α1和β5，而一個(gè)連接β3和連接β4與β5的多肽區(qū)段；和

(c)環(huán)區(qū)段A(LSA)和環(huán)區(qū)段B(LSB)，其中LSA連接β2和β3，而LSB連接β3和β4。

3.如權(quán)利要求1所述的文庫(kù)，還包括在C-端方向位于環(huán)2的C-末端鄰近的氨基酸的隨機(jī)置換。

4.如權(quán)利要求1所述的組合文庫(kù)，其中所述CTLD來(lái)自人四聯(lián)蛋白而且還包括精氨酸-130的隨機(jī)置換。

5.如權(quán)利要求1所述的組合文庫(kù)，其中所述CTLD來(lái)自人或小鼠四聯(lián)蛋白而且還包括賴氨酸-148置換為丙氨酸。

6.如權(quán)利要求4所述的組合文庫(kù)，其具有方案(a)的隨機(jī)化CTLD，其中所述氨基酸修飾包括在環(huán)1中的兩個(gè)氨基酸插入、在環(huán)1內(nèi)的至少五個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換和賴氨酸-148置換為丙氨酸。

7.如權(quán)利要求1所述的組合文庫(kù)，其具有方案(c)的隨機(jī)化CTLD，其中所述氨基酸修飾還包括在環(huán)4內(nèi)的至少兩個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換。

8.如權(quán)利要求7所述的組合文庫(kù)，其中所述氨基酸修飾包括在環(huán)1內(nèi)的至少七個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換、在環(huán)4中的至少三個(gè)氨基酸插入以及在環(huán)4內(nèi)的至少兩個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換。

9.如權(quán)利要求1所述的組合文庫(kù)，其具有方案(d)的隨機(jī)化CTLD，其中所述氨基酸修飾還包括在環(huán)4中的至少一個(gè)氨基酸插入。

10.如權(quán)利要求9所述的組合文庫(kù)，其中所述氨基酸修飾還包括在環(huán)4內(nèi)的至少三個(gè)氨基酸的隨機(jī)置換。