[發明專利]使用大鼠胚胎干細胞構建嵌合大鼠的方法

在審

• 申請號: 201080054625.6
• 申請日: 2010-11-30
• 公開（公告）號: CN102762717A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 落谷孝廣;川又理樹
• 申請（專利權）人: 日本國立癌癥研究中心;DS制藥生物醫學株式會社
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;A01K67/02;A01K67/027;C12N5/0735
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 龐立志;李進

1.?一種制備嵌合胚胎的方法，所述方法包括下述步驟（a）和（b）：

（a）在ES細胞分化抑制劑的存在下使從雌性大鼠采集的受精宿主胚胎與大鼠多能干細胞接觸的步驟，

（b）培養該與大鼠多能干細胞接觸的宿主胚胎以形成嵌合胚胎的步驟。

2.?根據權利要求1所述的方法，其中通過將大鼠多能干細胞注射進宿主胚胎中來實現所述接觸。

3.?根據權利要求1或2所述的方法，其中在步驟（a）中，在ES細胞分化抑制劑和ROCK抑制劑的存在下，使所述大鼠多能干細胞與所述宿主胚胎接觸。

4.?根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中在與大鼠多能干細胞接觸之前，在ES細胞分化抑制劑的存在下，預培養所述宿主胚胎。

5.?根據權利要求4所述的方法，其中在ES細胞分化抑制劑和ROCK抑制劑的存在下，進行所述預培養。

6.?根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其中在ES細胞分化抑制劑的存在下，進行步驟（b）中的培養。

7.?根據權利要求6所述的方法，其中在ES細胞分化抑制劑和ROCK抑制劑的存在下，進行步驟（b）中的培養。

8.?根據權利要求1-7中任一項所述的方法，其中所述ES細胞分化抑制劑由至少2種選自下述的藥物組成：MEK抑制劑、GSK3抑制劑、TGFβ受體抑制劑和FGF受體抑制劑。

9.?根據權利要求8所述的方法，其中所述ES細胞分化抑制劑由MEK抑制劑、GSK3抑制劑和TGFβ受體抑制劑組成。

10.?根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其中所述多能干細胞是ES細胞。

11.?根據權利要求1-10中任一項所述的方法，其中所述大鼠多能干細胞是從這樣的大鼠品系制備的多能干細胞：在步驟（a）中，在ES細胞分化抑制劑的非存在下與宿主胚胎接觸時，所述大鼠品系不會生產傳遞種系的嵌合大鼠。

12.?根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述宿主胚胎源自這樣的大鼠品系：在步驟（a）中，在ES細胞分化抑制劑的非存在下與大鼠多能干細胞接觸時，所述大鼠品系不會生產傳遞種系的嵌合大鼠。

13.?一種制備嵌合大鼠的方法，所述方法包括：將根據權利要求1-12中任一項所述的方法制備的嵌合胚胎移植進假妊娠的雌性大鼠的子宮或輸卵管中，以使后代大鼠生出。

14.?一種制備大鼠的方法，所述大鼠具有大鼠多能干細胞對整個身體的貢獻，所述方法包括：使嵌合大鼠與異性大鼠交配。

15.?一種用于制備嵌合大鼠的培養基，所述培養基包含MEK抑制劑、GSK3抑制劑和TGFβ抑制劑。

16.?根據權利要求15所述的培養基，所述培養基進一步包含ROCK抑制劑。

17.?一種基因修飾大鼠，其具有經歷雙等位基因基因修飾大鼠ES細胞的貢獻。

18.?一種制備基因修飾大鼠的方法，所述方法包括對大鼠ES細胞進行雙等位基因基因修飾的步驟。