[發明專利]用于干細胞成像的組合物和方法

有效

• 申請號: 201080051618.0
• 申請日: 2010-09-06
• 公開（公告）號: CN102803508A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: S·鮑米克;S·S·賈姆比爾;R·保羅慕魯甘;S·亞霍比;B-C·安;N·帕拉舒拉馬
• 申請（專利權）人: 通用電氣公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/10
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 孔青;林森

1.用于監測干細胞的表達載體，所述表達載體包含：

與包含啟動子的第一表達調控序列可操作地連接的第一報告核酸序列；和

與第二表達調控序列可操作地連接的第二報告核酸序列，其中所述第二表達調控序列包含對細胞分化或去分化的一個或多個階段應答而激活或失活的應答元件。

2.表達載體，所述表達載體包含：

與第一表達調控序列可操作地連接的第一報告核酸序列，所述第一表達調控序列包含一種或多種多能性標記的啟動子；和

與第二表達調控序列可操作地連接的第二報告核酸序列，所述第二表達調控序列包含對一種或多種應答元件特異性蛋白的結合應答的應答元件。

3.權利要求2的表達載體，其中所述啟動子選自Oct4、FoxD3、Sox2或Nanog。

4.權利要求2的表達載體，其中所述啟動子為Oct4。

5.權利要求2的表達載體，其中所述應答元件特異性蛋白為GATA4。

6.權利要求2的表達載體，其中所述細胞特異性蛋白選自FLK-1、BM88或HLA-Dra。

7.權利要求2的表達載體，其中所述第二表達調控序列還包含與所述應答元件可操作地連接的最小啟動子。

8.權利要求7的表達載體，其中所述最小啟動子選自CMV啟動子、腺病毒早期啟動子、腺病毒晚期啟動子和TATA框啟動子。

9.權利要求6的表達載體，其中所述應答元件包含GATA-4蛋白-結合序列的至少四個重復。

10.權利要求2的表達載體，其還包含與第三表達調控序列可操作地連接的第三報告核酸序列。

11.權利要求10的表達載體，其中所述第三表達調控序列包含組成型啟動子。

12.權利要求11的表達載體，其中所述組成型啟動子為泛素啟動子、雞β-肌動蛋白啟動子(CAG)、人ROSA啟動子。

13.權利要求10的表達載體，其中所述第一、第二或第三報告核酸序列中至少一種編碼多肽，所述多肽可通過光學成像、磁共振成像、正電子發射斷層顯像、單光子發射計算機斷層顯像或其組合來成像。

14.權利要求2的表達載體，其中所述第一或第二報告核酸序列中至少一種編碼可由正電子發射斷層顯像成像的多肽。

15.權利要求2的表達載體，其中至少所述第一或第二報告核酸序列中至少一種編碼與底物反應時產生生物發光的多肽。

16.權利要求2的表達載體，其中所述第一和第二報告核酸序列二者都編碼與底物反應時產生生物發光的多肽。

17.權利要求15或16的表達載體，其中所述編碼與底物反應時產生生物發光的多肽的第一或第二報告核酸序列中至少一種選自螢火蟲螢光素酶、海腎螢光素酶或gaussi螢光素酶。

18.權利要求2的表達載體，其中所述第一或第二或二種報告核酸序列都編碼本身產生熒光的多肽。

19.權利要求2的表達載體，其中所述第一報告核酸序列編碼海腎螢光素酶，所述第二報告核酸序列編碼螢火蟲螢光素酶。

20.包含權利要求2的表達載體的培養細胞。

21.包含權利要求1的表達載體的權利要求20的培養細胞的子代。

22.用于監測干細胞的方法，所述方法包括：

將包含第一報告核酸序列和第二報告核酸序列的第一表達載體遞送給所述干細胞；和

通過對所述第一或第二報告核酸序列表達的至少一種成像來監測所述干細胞，

其中所述第一報告核酸序列與第一表達調控序列可操作地連接，所述第一表達調控序列包含一種或多種多能性標記的啟動子，并且所述第二報告核酸序列與第二表達調控序列可操作地連接，所述第二表達調控序列包含對一種或多種應答元件特異性蛋白的結合應答的應答元件。

23.權利要求22的方法，其中所述啟動子選自Oct4、FoxD3、Sox2或Nanog。

24.權利要求22的方法，其中所述啟動子為Oct4。