[發(fā)明專利]具有纖維二糖水解酶活性的多肽和編碼該多肽的多核苷酸無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201080050305.3 | 申請日： | 2010-11-05 |
| 公開（公告）號： | CN103068976A | 公開（公告）日： | 2013-04-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | E.弗拉森科;M.斯特林格;K.施諾爾;B.麥克布雷爾 | 申請（專利權(quán)）人： | 諾維信股份有限公司;諾維信公司 |
| 主分類號： | C12N9/42 | 分類號： | C12N9/42 |
| 代理公司： | 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105 | 代理人： | 史悅 |
| 地址： | 美國加利*** | 國省代碼： | 美國;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 具有 纖維 糖水 活性 多肽 編碼 多核苷酸 | ||
1.一種具有纖維二糖水解酶活性的分離的多肽，其選自下組：
(a)多肽，其包含氨基酸序列，所述氨基酸序列與SEQ?ID?NO:2的成熟多肽具有至少65%同一性；
(b)多肽，其由多核苷酸編碼，所述多核苷酸在至少中等嚴格條件下與以下雜交：(i)SEQ?ID?NO:1的成熟多肽編碼序列，(ii)SEQ?ID?NO:1的成熟多肽編碼序列的基因組DNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全長互補鏈；
(c)多肽，其由多核苷酸編碼，所述多核苷酸包含核苷酸序列，所述核苷酸序列與SEQ?ID?NO:1的成熟多肽編碼序列具有至少65%同一性；和
(d)SEQ?ID?NO:2的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一個或多個(幾個)氨基酸的變體。
2.權(quán)利要求1的多肽，它包含SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列或其具有纖維二糖水解酶的片段，或由SEQ?ID?NO:2的氨基酸序列或其具有纖維二糖水解酶活性的片段組成。
3.權(quán)利要求1的多肽，其由包含于大腸桿菌DSM?23379中的質(zhì)粒pMStr199所包含的多核苷酸編碼。
4.一種分離的多核苷酸，其包含編碼權(quán)利要求1-3任一項的多肽的核苷酸序列。
5.一種產(chǎn)生權(quán)利要求1-3任一項的多肽的方法，包括：(a)在有助于所述多肽產(chǎn)生的條件下，培養(yǎng)以其野生型形式產(chǎn)生所述多肽的細胞；和(b)回收所述多肽。
6.一種產(chǎn)生權(quán)利要求1-3任一項的多肽的方法，包括：(a)在有助于所述多肽產(chǎn)生的條件下，培養(yǎng)包含核酸構(gòu)建體的宿主細胞，所述核酸構(gòu)建體包含編碼所述多肽的核苷酸序列；和(b)回收所述多肽。
7.一種產(chǎn)生親本細胞的突變體的方法，包括破壞或缺失編碼權(quán)利要求1-3任一項所述多肽或其部分的多核苷酸，導(dǎo)致所述突變體與親本細胞相比較產(chǎn)生較少的所述多肽。
8.一種產(chǎn)生權(quán)利要求1-3任一項的多肽的方法，包括：(a)在有助于所述多肽產(chǎn)生的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因植物或植物細胞，所述植物或植物細胞包含編碼所述多肽的多核苷酸；和(b)回收所述多肽。
9.一種轉(zhuǎn)基因植物、植物部分或植物細胞，其用編碼權(quán)利要求1-3任一項的多肽的多核苷酸轉(zhuǎn)化。
10.一種雙鏈抑制性RNA(dsRNA)分子，包含權(quán)利要求9的多核苷酸的亞序列，其中任選地所述dsRNA是siRNA或miRNA分子。
11.一種在細胞中抑制具有纖維二糖水解酶活性的多肽的表達的方法，包括向所述細胞施用或在所述細胞中表達權(quán)利要求10的雙鏈抑制性RNA分子。
12.一種分離的多核苷酸，其編碼信號肽，所述信號肽包含SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至16，或由SEQ?ID?NO:2的氨基酸1至16組成。
13.一種產(chǎn)生蛋白的方法，包括：(a)在有助于產(chǎn)生所述蛋白的條件下培養(yǎng)重組宿主細胞，所述細胞包含編碼蛋白的基因，所述基因可操作地連接于權(quán)利要求12的多核苷酸，其中所述基因?qū)τ谒龆嗪塑账崾峭庠吹模缓?b)回收所述蛋白。
14.一種降解或轉(zhuǎn)化纖維素材料的方法，包括在權(quán)利要求1-3任一項的多肽的存在下用酶組合物處理所述纖維素材料。
15.權(quán)利要求14的方法，進一步包括回收降解的纖維素材料。
16.一種產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物的方法，包括：
(a)在權(quán)利要求1-3任一項的多肽的存在下用酶組合物糖化纖維素材料；
(b)用一種或多種(幾種)發(fā)酵微生物發(fā)酵經(jīng)糖化的纖維素材料以產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物；和
(c)從所述發(fā)酵回收所述發(fā)酵產(chǎn)物。
17.一種發(fā)酵纖維素材料的方法，包括用一種或多種(幾種)發(fā)酵微生物發(fā)酵纖維素材料，其中所述纖維素材料是在權(quán)利要求1-3任一項的多肽存在下用酶組合物糖化的。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述纖維素材料的發(fā)酵產(chǎn)生發(fā)酵產(chǎn)物。
19.權(quán)利要求18的方法，進一步包括從所述發(fā)酵回收所述發(fā)酵產(chǎn)物。
20.權(quán)利要求18或19的方法，其中所述發(fā)酵產(chǎn)物是醇、有機酸、酮、氨基酸或氣體。
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