[發明專利]用于生產糖基化免疫球蛋白的方法

有效

• 申請號: 201080048412.2
• 申請日: 2010-10-25
• 公開（公告）號: CN102596995A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: R·弗蘭策;平島親;T·林克;高本良智;田熊晉也;津田祐理子
• 申請（專利權）人: 弗·哈夫曼-拉羅切有限公司;中外制藥株式會社
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所 11247
• 代理人: 史文靜;黃革生

1.用于生產免疫球蛋白的方法，所述方法包括：

a)在培養基中培養包含編碼免疫球蛋白的核酸的真核細胞，其中培養基中單個細胞當前的比葡萄糖消耗速率與該種細胞的最大已知的比葡萄糖消耗速率的比例保持恒定，和

b)從培養物中回收免疫球蛋白。

2.根據權利要求1的方法，其特征在于比例是從0.8至0.2。

3.根據權利要求2的方法，其特征在于比例是從0.6至0.4。

4.用于生產免疫球蛋白的方法，其包括：

a)在培養基中培養包含編碼免疫球蛋白的核酸的真核細胞，其中每時間單位培養基中可用的葡萄糖的量保持恒定，并限制在少于每時間單位培養基中細胞最大能夠利用的量的80％的恒定值，和

b)從培養物中回收免疫球蛋白。

5.根據權利要求4的方法，其特征在于恒定值少于80％且多于20％。

6.根據任一項前述權利要求的方法，其特征在于培養是補料-分批培養。

7.根據權利要求6的方法，其特征在于培養是補料-分批培養，其中補料在培養的第2天或第3天開始。

8.根據任一項前述權利要求的方法，其特征在于培養在從pH?6.5至7.5的pH值下。

9.根據權利要求8的方法，其特征在于培養在從pH?6.9至7.3的pH值下。

10.根據權利要求9的方法，其特征在于培養在從pH?6.95至pH?7.05的pH值下或在從pH?7.15至pH?7.25的pH值下。

11.根據任一項前述權利要求的方法，其特征在于免疫球蛋白是G類或E類免疫球蛋白。

12.根據任一項前述權利要求的方法，其特征在于真核宿主細胞選自CHO細胞、NS0細胞、HEK細胞、BHK細胞、雜交瘤細胞、細胞、昆蟲細胞和Sp2/0細胞。

13.根據權利要求12的方法，其特征在于真核細胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。

14.根據任一項前述權利要求的方法，其特征在于宿主細胞的培養實施6至20天。

15.根據任一項前述權利要求的方法，其特征在于免疫球蛋白是抗IL-6R抗體。

16.根據權利要求1-15的任一項方法的用途，用于減少免疫球蛋白制備物中具有甘露糖-5糖基結構的免疫球蛋白的量。

17.包含免疫球蛋白的組合物，其特征在于所述組合物是用根據權利要求1-15的任一項方法制備的。

18.根據權利要求17的組合物，其特征在于免疫球蛋白是抗IL-6R抗體。

19.根據權利要求17的組合物，其特征在于抗IL-6R抗體包含Tocilizumab。

20.根據權利要求17-19的任一項的組合物，其特征在于附著于抗IL-6R抗體的甘露糖-5糖基結構是8％或更少。

21.根據權利要求20的組合物，其特征在于甘露糖-5糖基結構是6％或更少。

22.根據權利要求21的組合物，其特征在于甘露糖-5糖基結構是4％或更少。

23.根據權利要求18-22的任一項的組合物，其特征在于附著于抗IL-6R抗體的G(0)糖基結構是在從40％至46％的范圍內并且附著于抗IL-6R抗體的G(2)糖基結構是在從9％至11％的范圍內。