[發(fā)明專利]連續(xù)回收收獲袋

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080048344.X
• 申請(qǐng)日: 2010-08-26
• 公開（公告）號(hào): CN102575219B
• 公開（公告）日: 2019-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: C.圖伊;T.厄爾登伯格;R.達(dá)姆倫;M.費(fèi)希爾;J.斯威比斯
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 通用電氣醫(yī)療集團(tuán)生物科學(xué)公司
• 主分類號(hào): C12N1/02
• 分類號(hào): C12N1/02
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 林森

一種能夠保存液體的無(wú)孔容器，所述無(wú)孔容器包括外壁表面和內(nèi)壁表面，所述內(nèi)壁表面限定了保存液體的內(nèi)室；濾器，其具有周邊、第一表面和第二表面，并且環(huán)繞其整個(gè)周邊固定連接至所述無(wú)孔容器的內(nèi)壁表面的部分，因而在所述無(wú)孔容器內(nèi)形成整合的內(nèi)袋；以及配件，其在與所述整合的內(nèi)袋的第一表面相鄰的外壁表面的部分連接至所述無(wú)孔容器的外壁，所述配件形成通孔，通孔設(shè)置用于允許液體從內(nèi)室流經(jīng)所述整合的內(nèi)袋，流經(jīng)濾器，并從所述通孔流出。

相關(guān)申請(qǐng)

本申請(qǐng)根據(jù)35 USC 119(e)要求于2009年8月26日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/237,286和于2009年9月8日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/240,323的優(yōu)先權(quán)，將兩者以其全文在此引入作為參考。

發(fā)明領(lǐng)域

本公開涉及收獲細(xì)胞的裝置和方法，所述細(xì)胞在例如二維一次性袋(twodimensional disposable bag)或三維一次性臺(tái)式生物反應(yīng)器袋(three dimensionaldisposable bench top bioreactor bag)或更大的一次性生物反應(yīng)器中的微載體上生長(zhǎng)。

背景技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)是制備許多生物產(chǎn)品必不可少的步驟，所述生物產(chǎn)品例如核酸、用于疫苗中的病毒、抗體和蛋白(例如干擾素)。依賴貼壁細(xì)胞(例如一些動(dòng)物細(xì)胞)需要附著于表面以生長(zhǎng)和分裂。

對(duì)于大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)，微載體提供了依賴貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)所需的較大表面積。VanWezel于1967公開了微載體、小珠子(bead)或直徑約0.2mm的顆粒在所述細(xì)胞生長(zhǎng)中的用途。在生物反應(yīng)器袋內(nèi)將所述微載體混懸于培養(yǎng)基中。將細(xì)胞(接種物)加入混懸有所述微載體的液體培養(yǎng)基中。在該細(xì)胞培養(yǎng)方法中，有時(shí)用溫和的攪動(dòng)來(lái)幫助所述微載體珠子保持混懸。

不依賴貼壁細(xì)胞(又名“懸浮細(xì)胞”)不需要生長(zhǎng)于其上的固體載體，并且能夠生長(zhǎng)于細(xì)胞混懸液中。

連續(xù)或灌注模式：在連續(xù)或灌注模式中，新鮮的富營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基連續(xù)地流經(jīng)附著細(xì)胞群的微珠混懸液，或流經(jīng)細(xì)胞混懸培養(yǎng)液。在整個(gè)培養(yǎng)期中都可收獲產(chǎn)物。除去了毒性代謝產(chǎn)物，且有時(shí)除去了死細(xì)胞。在混懸培養(yǎng)液中，由于細(xì)胞的尺寸較小，因此除去營(yíng)養(yǎng)枯竭的培養(yǎng)基同時(shí)在生物反應(yīng)器中保留細(xì)胞的方法存在持續(xù)的問(wèn)題。現(xiàn)有的過(guò)濾方法和系統(tǒng)存在一些典型的缺點(diǎn)，包括濾器的堵塞和所述生物反應(yīng)器內(nèi)死細(xì)胞的蓄積。這些問(wèn)題影響了回收的產(chǎn)物量，并使所述灌注生物反應(yīng)器系統(tǒng)難以放大至工業(yè)規(guī)模。

分批模式：在分批模式中，在開始時(shí)加入所有營(yíng)養(yǎng)素，且直到一批結(jié)束時(shí)才取出產(chǎn)物。廢物在進(jìn)程中蓄積并且營(yíng)養(yǎng)素被用盡，使所述分批方法在很多應(yīng)用中并不有效。

補(bǔ)料分批模式：補(bǔ)料分批模式與分批模式的相似之處在于產(chǎn)物只在進(jìn)程結(jié)束時(shí)才被取出，但不同之處在于在該方法過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)素以多次間隔加入。

在上述各個(gè)模式中，細(xì)胞群可將感興趣的產(chǎn)物分泌或釋放入培養(yǎng)基中。通過(guò)從所述生物反應(yīng)器袋取出至少一部分所述培養(yǎng)基而收獲產(chǎn)物，同時(shí)在所述生物反應(yīng)器袋中留下來(lái)自細(xì)胞混懸液或附著細(xì)胞群的微載體珠子的細(xì)胞。如上文所述，在連續(xù)或灌注模式中，在整個(gè)培養(yǎng)期中收獲產(chǎn)物。在分批和補(bǔ)料分批模式中，產(chǎn)物只在進(jìn)程結(jié)束時(shí)才取出。

在培養(yǎng)細(xì)胞的這些模式的每一個(gè)中，在收獲期中從培養(yǎng)基分離微載體珠子或細(xì)胞的最常規(guī)方法是使所述珠子或細(xì)胞沉降然后傾倒該液體，或在外部過(guò)濾該混合物。這些方法都不有效，并且都需要大量時(shí)間以完成分離。

外部濾器可用于法向流過(guò)濾(Normal Flow Filtration，NFF)中，其中液體流接近法向，即垂直于濾器表面。除了NFF是一種相對(duì)較慢的方法之外，在NFF中未通過(guò)濾器的顆粒會(huì)蓄積并且容易堵塞濾器。