[發明專利]來自雞卡氏桿菌的細胞溶解性RTX-毒素

無效

• 申請號: 201080045643.8
• 申請日: 2010-10-07
• 公開（公告）號: CN102781954A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發明（設計）人: 安德斯·麥基·玻約森;博迪爾·瑪麗·克里斯滕森
• 申請（專利權）人: 哥本哈根大學
• 主分類號: C07K14/285
• 分類號: C07K14/285;A61K39/102;C07K16/12;C12N15/09;C12Q1/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 徐金國

1.一種分離的多肽，所述多肽包含選自以下群組中的氨基酸序列

a)SEQ?ID?No.1、2或3；

b)選自由SEQ?ID?No.1、2和3構成的組的氨基酸序列的序列變異體，其中所述變異體與所述SEQ?ID?No.具有至少70％的序列同一性；以及

c)由a)中的任一者的至少150個連續氨基酸所組成的片段，其中所選序列中指定的任一氨基酸改變為不同氨基酸，限制條件是所述序列中不超過30個所述氨基酸被如此改變。

2.如權利要求1所述的多肽，其為選自由SEQ?ID?No.1、2和3構成的組的序列的天然存在的等位基因變異體。

3.如權利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含源自巴斯德桿菌科，更優選為源自卡氏桿菌屬，更優選選自由雞卡氏桿菌、卡氏桿菌基因種1及卡氏桿菌基因組2構成的組的氨基酸序列。

4.如權利要求1所述的多肽，其為在此描述的變異多肽，其中所選序列中指定的任一氨基酸被改變以提供保守性取代。

5.如權利要求1所述的多肽，其中所述信號肽由異源信號肽置換。

6.如權利要求1所述的多肽，其與SEQ?ID?No.1具有至少70％的序列同一性，更優選為至少75％，更優選為至少80％，更優選為至少85％，更優選為至少90％，更優選為至少95％，更優選為至少98％，更優選為具有所述SEQ?ID?No.1的序列的多肽。

7.如權利要求1所述的多肽，其與SEQ?ID?No.2具有至少70％的序列同一性，更優選為至少75％，更優選為至少80％，更優選為至少85％，更優選為至少90％，更優選為至少95％，更優選為至少98％，更優選為具有所述SEQ?ID?No.2的序列的多肽。

8.如權利要求1所述的多肽，其與SEQ?ID?No.3具有至少70％的序列同一性，更優選為至少75％，更優選為至少80％，更優選為至少85％，更優選為至少90％，更優選為至少95％，更優選為至少98％，更優選為具有所述SEQ?ID?No.3的序列的多肽。

9.如權利要求1所述的多肽，或其片段，其中所述片段包含至少150個氨基酸，優選為至少200個氨基酸，更優選為至少300個氨基酸，更優選為至少500個氨基酸，更優選為至少750個氨基酸，更優選為至少1000個氨基酸，更優選為1250個氨基酸，更優選為1500個氨基酸，更優選為1750個氨基酸，最優選為2000個氨基酸。

10.如權利要求1所述的多肽，其中所述多肽已經過特定修飾而移除毒性活性。

11.如權利要求1所述的多肽，其中所述變異體是具有生物活性的。

12.如權利要求11所述的多肽，其中生物活性為毒性，其中所述毒性包含在接受體內形成孔，更優選為細胞毒性，更優選為細胞溶解性細胞毒性，甚至更優選為溶血性細胞毒性。

13.如權利要求9至11所述的多肽，其中所述變異體具有免疫原性。

14.如權利要求9所述的多肽，其中所述片段與SEQ?ID?NO?1相比含有不超過30個氨基酸取代，更優選為不超過25個，更優選為不超過20個，更優選為不超過15個，更優選為不超過10個，更優選為不超過5個，更優選為不含氨基酸取代。

15.如前所述的權利要求中任一項所述的多肽，其進一步包含親和性標簽，諸如polyHis標簽、GST標簽、HA標簽、FLAG標簽、C-myc標簽、HSV標簽、V5標簽、麥芽糖結合蛋白標簽、纖維素結合域標簽、BCCP標簽、鈣調蛋白標簽、Nus標簽、谷胱甘肽-S-轉移酶標簽、綠色熒光蛋白標簽、硫氧還蛋白標簽、S標簽、Strep標簽。

16.如權利要求15所述的多肽，其中任一親和性標簽是可切割的。

17.如權利要求1至16中任一項所述的多肽，其為失活的。

18.如權利要求17所述的多肽，其中所述多肽通過熱或輻射而失活。

19.如權利要求17所述的多肽，其中所述多肽為化學失活的，優選通過暴露于甲醛而化學失活。

20.如權利要求17所述的多肽，其中所述多肽是SEQ?ID?No.1的未酰化形式。