[發明專利]臨床前測試免疫調節藥物的方法

有效

• 申請號: 201080043555.4
• 申請日: 2010-09-28
• 公開（公告）號: CN102597768A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 托馬斯·許尼希
• 申請（專利權）人: 希拉麥博股份有限公司
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50;G01N33/68
• 代理公司: 北京金信立方知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 朱梅;陳國軍

1.一種測試用于T-細胞活化的預期或已知免疫調節藥物的方法，包括以下步驟：在體外使外周血單核細胞(PBMC)培養物與預定量的所述預期或已知免疫調節藥物接觸；以及當與所述預期或已知免疫調節藥物接觸時，使用讀出系統觀察用于T-細胞活化的所述PBMC培養物，其中調節PBMC預培養物的細胞密度使得所述PBMC能夠細胞-細胞接觸，并且其中培養所述PBMC預培養物至少12h。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述讀出系統觀察所述PBMC培養物從PBMC釋放至少一種細胞因子，觀察細胞增殖，或者為另一種合適的讀出系統，如基因表達的變化、蛋白質表達的變化和/或翻譯后修飾的變化。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中，在沒有免疫調節藥物的情況下，并且在與要測試的免疫調節藥物接觸之前，通過在35℃～40℃，優選36℃～38℃，儲存PBMC培養物至少24h，優選至少36h，更優選至少45h來進行預培養步驟。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，在預培養步驟期間，所述PBMC培養物的細胞密度至少為2＊10⁶/ml，優選至少為5＊10⁶/ml，更優選至少為10⁷/ml，或者至少為4＊10⁵/cm²，優選至少為10⁶/cm²，最優選至少為2＊10⁶/cm²。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的方法，其中，所述免疫調節藥物為免疫刺激藥物，如抗體，優選單克隆抗體，尤其人CD28特異性超拮抗單克隆抗體，或者選自凝集素，如刀豆素A(ConA)，或植物凝集素(PHA)；包含凝集素的天然提取物，如松果菊提取物，或槲寄生提取物；超抗原，如葡萄球菌腸毒素B(SEB)，葡萄球菌腸毒素A(SEA)，中毒性休克綜合征毒素-1(TSST-1)；葡萄球菌生膿原，如葡萄球菌生膿腸毒素B(SPEB)；由支原體產生的超抗原，如支原體anthriditis；或者由黑鼠疫細菌產生的超抗原，如假結核耶爾森氏菌；由某些致病病毒產生的超抗原，如EBV或HIV-1。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其中，所觀察的細胞因子選自TNF、IFN-γ、IL-1-β、IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL12p70、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-21、IL-35和LT，以及它們的組合。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的方法，其中，在將所述PBMC培養物與已知免疫調節藥物，尤其免疫刺激藥物，接觸的同時，或者隨后在預定的一段時間之后，或者在預定的一段時間之前，使所述預培養的PBMC培養物另外地與用于減弱至少一種細胞因子釋放的預期藥物接觸，其中進一步觀察細胞因子釋放。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述預定的一段時間在10s至12h的范圍內，優選在10s至1h的范圍內。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其中，所述用于減弱細胞因子釋放的預期藥物為皮質類固醇。

10.根據權利要求7或8所述的方法，其中，所述用于減弱細胞因子釋放的預期藥物為選自納巴霉素或者如環胞素A、Voclosporin或他克莫司的鈣神經素抑制劑的免疫抑制藥物。

11.皮質類固醇、納巴霉素和/或鈣神經素抑制劑，其用于治療、減弱或防止在施用抗人CD28特異性超拮抗單克隆抗體時的細胞因子風暴的用途。

12.用于根據權利要求11中所述用途的皮質類固醇和/或鈣神經素抑制劑，其中，所述抗體為TGN1412。

13.用于根據權利要求11或12中所述用途的皮質類固醇和/或鈣神經素抑制劑，其中，所述皮質類固醇為地塞米松和/或甲潑尼龍。

14.用于根據權利要求11-13中任一項中所述用途的皮質類固醇和/或鈣神經素抑制劑，其中，所述鈣神經素抑制劑為環胞素A、Voclosporin和/或他克莫司。