[發(fā)明專利]制備用于分析的樣品的方法和用于該制備方法的柱體

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080043085.1
• 申請日: 2010-08-04
• 公開（公告）號: CN102695950A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發(fā)明（設計）人: 陳功
• 申請（專利權）人: 福瑞托-雷貿易公司股份有限公司
• 主分類號: G01N1/40
• 分類號: G01N1/40
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭小粵

技術領域

本發(fā)明涉及制備在分析過程中使用的樣品的方法并涉及用于該制備方法的柱體。具體地，本發(fā)明涉及含有萃取來自食品的水溶性分析物，例如丙烯酰胺的樣品的制備。

背景技術

從食品中萃取化合物用于分析是已知的。例如，已知使用固相萃取（SPE）以從食品的萃取物中去除雜質并將純化樣品通過液相色譜/串聯(lián)質譜（LC/MS/MS）技術進行分析。SPE利用溶解或懸浮于液體中（已知為流動相）的溶質的親和性，對于固體（固體已知為固定相并包括吸附材料），樣品通過該固體將混合物分離為需要的和不需要的成分。以填充有吸附材料的注射器形的柱體形式設置該固定相。可以選擇吸附材料以在其上通過吸收保留需要的分析物或不需要的雜質。已經開發(fā)了一些特定分析物和特定溶劑的SPE系統(tǒng)，它們使用特定的SPE吸附劑。例如，已知使用多層吸附劑（已知為USA，PA，貝爾豐特的Sigma-Aldrich公司市售的Supelclean?ENVI-Carb-II/PSE?SPE管）的SPE柱體用于從農產品中使用例如乙腈的有機溶劑萃取農藥。

近年來，一些健康和安全機構已經開始關注某些食品中存在的據(jù)信是某些烹制過程的副產品生成的化學丙烯酰胺。美國食品和藥物管理局（FDA）已經開發(fā)了用于定量確定食品中的丙烯酰胺的分析方法（美國健康和人類服務局部門，美國食品和藥物管理局，食品安全和應用營養(yǎng)中心，植物和奶制品和飲料辦公室于2002年6月20日草擬，于2002年7月23日和2003年2月24日更新的“食品中的丙烯酰胺的檢測和定量”）。

由FDA開發(fā)的該方法使用與相關設備一套的特定的固相萃取（SPE）方法以在清理過程中從食品的含有丙烯酰胺的萃取物中去除雜質，以制備通過液相色譜/串聯(lián)質譜（LC/MS/MS）技術用于后續(xù)分析的樣品。

具體地，F(xiàn)DA丙烯酰胺LC/MS/MS樣品清理過程使用兩個連續(xù)的且獨立的清理過程，每個過程使用單獨的SPE柱體，每個柱體含有單獨的固定相。用于第一SPE步驟中的第一SPE柱體使用高分子吸附劑，USA，MA，米爾福特的Waters公司市售的OasisHLB作為固定相，并且用于第二SPE步驟中的第二SPE柱體使用顯示出強陽離子交換和強陰離子交換并含有C₈活性基團的混合模式的吸附劑，USA，CA，城市海港的Varian有限公司市售的Bond?Elut?Accucat作為固定相。

更詳細地，F(xiàn)DA清理過程需要使用第一柱體的如下的第一清理過程：用3.5ml的甲醇調節(jié)OASIS?SPE柱體，隨后用3.5ml的水調節(jié)該柱體。廢棄使用過的甲醇和水部分以制備柱體。用1.5ml的試驗部分萃取液填充OASIS?SPE柱體。使得萃取液完全通過該吸附材料。用0.5ml的水洗脫柱體并廢棄。再用1.5ml的水洗脫柱體并收集用于后續(xù)的SPE柱體清理。

使用第二柱體進行如下的第二后續(xù)清理過程：在高于吸附劑床上面的1ml液體的高度在Varian?SPE柱體的外面設置標記。用2.5ml的甲醇調節(jié)Varian?SPE柱體，隨后用2.5ml的水調節(jié)該柱體。廢棄使用的甲醇和水部分以制備柱體。用1.5ml的從第一清理步驟中收集的部分填充并在收集洗脫過的部分的剩余物之前洗脫到1ml的標記處。轉移到2ml的琥珀色自動取樣瓶用于LC/MS/MS分析。

FDA試驗方案顯示出可以實現(xiàn)高度的試驗精確度，例如十億分之50的精確度。但是，實現(xiàn)這一精確度的代價是該試驗方案是非常耗時且嚴格的。例如，修訂的分析方法要求人員在大約1.5小時內制備12個用于分析的部分。手動多個步驟的方法是非常耗時且勞動密集的。此外，F(xiàn)DA發(fā)現(xiàn)對于第一清理步驟，在方法的開發(fā)中試驗了許多SPE柱體，并且它們中的全部都具有不同的分析物的保留和洗脫特性。因此，該方案規(guī)定不能在沒有試驗的這一步驟中替換另一種SPE吸附劑。此外，該方案規(guī)定不能為了在任何SPE步驟中加快洗脫過程使用真空。換句話說，在SPE步驟中，需要流動的液相在重力的作用下逐滴地通過固定的固相。

雖然從文獻中已知的是兩個柱體可以通過連接器的連接被垂直堆疊，但是本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)這樣的堆疊在機械上是不穩(wěn)定的，受到的高背壓阻止液體通過其進行流動，并且對于自動的SPE清理是不適合的。因此，雖然自動的SPE清理作為技術本身是已知的，但是仍然存在的問題是如何自動進行丙烯酰胺的清理同時仍然可以在該方案本身的范圍內進行操作。