[發明專利]改進的LOV-D?；D移酶介導的酰化作用

有效

• 申請號: 201080043043.8
• 申請日: 2010-09-24
• 公開（公告）號: CN102712678A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 史蒂文·詹姆斯·科利爾;張易玲;喬利·蘇庫瑪蘭;羅伯特·約翰·威爾遜;徐俊業
• 申請（專利權）人: 科德克希思公司
• 主分類號: C07K14/00
• 分類號: C07K14/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 申基成;鄭霞

1.一種制備抑制素化合物的方法，所述方法包括在硫酯供體和選自硫醇清除劑、沉淀劑和其組合的試劑存在下，在產生抑制素化合物的條件下使LovD?；D移酶底物與LovD?；D移酶接觸。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述LovD?；D移酶底物是紅曲菌素J。

3.根據權利要求2所述的方法，其中所述紅曲菌素J是紅曲菌素J羥酸鹽。

4.根據權利要求2所述的方法，其中所述紅曲菌素J是紅曲菌素J內酯。

5.根據權利要求1所述的方法，其中所述LovD?；D移酶底物是洛伐他汀。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述洛伐他汀是洛伐他汀羥酸鹽。

7.根據權利要求5所述的方法，其中所述洛伐他汀是洛伐他汀內酯。

8.根據權利要求1所述的方法，其中所述LovD酰基轉移酶底物是6-羥基-6-去甲基-紅曲菌素-J。

9.根據權利要求8所述的方法，其中所述6-羥基-6-去甲基-紅曲菌素J是6-羥基-6-去甲基-紅曲菌素J羥酸鹽。

10.根據權利要求8所述的方法，其中所述6-羥基-6-去甲基-紅曲菌素J是6-羥基-6-去甲基-紅曲菌素J內酯。

11.根據權利要求1所述的方法，其中所述LovD?；D移酶底物是普伐他汀。

12.根據權利要求11所述的方法，其中所述普伐他汀是普伐他汀羥酸鹽。

13.根據權利要求11所述的方法，其中所述普伐他汀是普伐他汀內酯。

14.根據權利要求1-13任一項所述的方法，其中所述硫酯供體是α-二甲基丁酰硫酯。

15.根據權利要求14所述的方法，其中所述α-二甲基丁酰硫酯選自由α-二甲基丁酰-S-巰基丙酸甲酯(DMB-S-MMP)、二甲基丁酰-S-巰基丙酸乙酯(DMB-S-EMP)、二甲基丁酰-S-巰基乙酸甲酯(DMB-S-MTG)、二甲基丁酰-S-巰基丁酸甲酯(DMB-S-MMB)、S-2-乙酰氨基乙基2，2-二甲基硫代丁酸酯、S-乙酰氨基甲基2，2-二甲基硫代丁酸酯和2-(2，2-二甲基硫代丁酰)乙酸甲酯組成的組。

16.根據權利要求15所述的方法，其中所述α-二甲基丁酰硫酯是DMB-S-MMP。

17.根據權利要求14所述的方法，所述方法在pH范圍約pH?8至pH9.5的水性介質中進行。

18.根據權利要求14所述的方法，所述方法在具有約pH?9的初始pH的水性緩沖液中進行。

19.根據權利要求14所述的方法，其中所述試劑是硫醇清除劑。

20.根據權利要求19所述的方法，其中所述硫醇清除劑是活性炭。

21.根據權利要求14所述的方法，其中所述試劑是沉淀劑。

22.根據權利要求21所述的方法，其中所述沉淀劑是氫氧化銨。

23.根據權利要求14所述的方法，其中所述LovD?；D移酶是具有選自表2的氨基酸序列的LovD變體。

24.根據權利要求14所述的方法，其中所述LovD酰基轉移酶是具有對應于SEQ?ID?NO：116的氨基酸序列的LovD變體。

25.一種制備斯伐他汀羥酸銨鹽的方法，所述方法包括在α-二甲基丁酰硫酯供體和氫氧化銨存在下，在產生斯伐他汀羥酸銨鹽的條件下使紅曲菌素J或洛伐他汀與LovD酰基轉移酶接觸。

26.根據權利要求25所述的方法，所述方法在pH范圍約pH?8至pH9.5的水溶液中進行。

27.根據權利要求25所述的方法，所述方法在具有約pH?9的初始pH的水性緩沖液中進行。