[發明專利]真菌蛋白酶及其用途

有效

• 申請號: 201080039991.4
• 申請日: 2010-07-08
• 公開（公告）號: CN102625810A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: L.瓦爾塔卡里;K.容圖南;S.馬基南;P.奧賈帕洛;M.帕羅海莫
• 申請（專利權）人: 生化酶股份有限公司
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37;C12N15/11;C12P21/02;C12R1/00;C12R1/885
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李慧惠;郭文潔

1.?一種真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶具有絲氨酸蛋白酶活性，并且包含如SEQ?ID?NO:10中定義的成熟Tr?Prb1酶的氨基酸序列或其具有相似性質的變體，其中所述酶可在低溫或中等溫度應用于修飾、降解或去除蛋白質性質的材料。

2.?根據權利要求1的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶可作為去垢劑添加劑應用。

3.?根據權利要求1或2的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶可得自絲狀真菌木霉屬。

4.?根據權利要求1?–?3中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶具有絲氨酸蛋白酶活性，并且包含所述氨基酸序列SEQ?ID?NO:10。

5.?根據權利要求1?–?4中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于成熟形式的所述酶具有25?-?35?kDa的分子質量。

6.?根據權利要求1?–?5中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于使用15分鐘反應時間和酪蛋白作為底物，所述酶在pH?9的最適溫度是30℃?-?70℃。

7.?根據權利要求1?–?6中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于使用15分鐘反應時間和酪蛋白作為底物，所述酶在50℃具有在至少pH?6?–?pH?11的pH范圍的最適pH。

8.?根據權利要求1?–?7中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶能夠在10℃?-?60℃在去垢劑的存在下降解且去除蛋白質性質的污物。

9.?根據權利要求1?–?8中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由分離的核酸分子編碼，所述分離的核酸分子編碼包含特征在于SEQ?ID?NO:10的氨基酸序列或其具有相似性質的變體的多肽。

10.?根據權利要求1?–?9中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由包含核苷酸序列SEQ?ID?NO:9的分離的核酸分子編碼。

11.?根據權利要求1?–?10中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由包括在pALK2650中的多核苷酸序列SEQ?ID?NO:5編碼，所述pALK2650在登記號DSM?22635下保藏于大腸埃希氏菌RF8052中。

12.?根據權利要求1?–?11中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶由包含與調節序列可操作地連接的核酸分子的重組表達載體產生，所述核酸分子編碼根據權利要求1?–?11中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，所述調節序列能夠指導所述絲氨酸蛋白酶編碼基因在合適宿主中的表達。

13.?根據權利要求1?–?12中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在異源宿主中產生。

14.?根據權利要求1?–?13中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在微生物宿主中產生。

15.?根據權利要求1?–?14中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在木霉屬、曲霉屬、鐮刀菌屬、腐質霉屬、金孢屬、鏈孢霉屬、根霉屬、青霉屬和被孢霉屬的宿主中產生。

16.?根據權利要求15的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在木霉屬或曲霉屬中產生。

17.?根據權利要求16的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述酶在里氏木霉中產生。

18.?一種編碼真菌絲氨酸蛋白酶的分離的核酸分子，所述酶可在低溫或中等溫度應用于修飾、降解或去除蛋白質性質的材料，所述核酸分子選自下述：

（a）編碼具有絲氨酸蛋白酶活性且包含如SEQ?ID?NO:10中所述的氨基酸序列或其具有相似性質的變體的多肽的核酸分子；

（b）包含如SEQ?ID?NO:9中所述的多核苷酸序列的核酸分子；

（c）包含在DSM?22635中含有的多核苷酸序列SEQ?ID?NO:5的編碼序列的核酸分子；

（d）由于遺傳密碼的簡并性，其多核苷酸序列不同于（b）-（c）的核酸分子的多核苷酸序列的核酸分子。

19.?根據權利要求18的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于所述真菌絲氨酸蛋白酶可作為去垢劑添加劑應用。