[發明專利]具有纖維二糖水解酶活性的多肽和編碼該多肽的多核苷酸

有效

• 申請號: 201080034294.X
• 申請日: 2010-05-27
• 公開（公告）號: CN102482652A
• 公開（公告）日: 2012-05-30
• 發明（設計）人: 劉曄;湯嵐;P.哈里斯;吳文平
• 申請（專利權）人: 諾維信股份有限公司;諾維信公司
• 主分類號: C12N9/14
• 分類號: C12N9/14
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 封新琴

1.一種具有纖維二糖水解酶活性的分離的多肽，其選自下組：

(a)多肽，其與SEQ?ID?NO：2或SEQ?ID?NO：4的成熟多肽具有至少90％，例如，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性；

(b)多肽，其由多核苷酸編碼，所述多核苷酸在高嚴格條件下或非常高嚴格條件下與以下雜交：(i)SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：3的成熟多肽編碼序列，(ii)包含于SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：3的成熟多肽編碼序列中的cDNA序列，或(iii)(i)或(ii)的全長互補鏈；

(c)多肽，其由多核苷酸編碼，所述多核苷酸與SEQ?ID?NO：1或SEQ?ID?NO：3的成熟多肽編碼序列具有至少90％，例如，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性；

(d)SEQ?ID?NO：2或SEQ?ID?NO：4的成熟多肽的包含取代、缺失和/或插入一個或多個(幾個)氨基酸的變體；和

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽具有纖維二糖水解酶活性的片段。

2.權利要求1的多肽，所述多肽由包含于大腸桿菌DSM?22598中的質粒pGEM-T-CBHII45097所包含的多核苷酸編碼，或由包含于大腸桿菌DSM?22599中的質粒pGEM-T-CBHII45178所包含的多核苷酸編碼。

3.一種組合物，其包含權利要求1或2的多肽。

4.一種分離的多核苷酸，其編碼權利要求1或2的多肽。

5.一種重組宿主細胞，其包含權利要求4的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地連接于一個或多個指導所述多肽的產生的調控序列。

6.一種產生權利要求1或2的多肽的方法，包括：

(a)在有助于所述多肽產生的條件下培養以其野生型形式產生所述多肽的細胞；和

(b)回收所述多肽。

7.一種產生具有纖維二糖水解酶活性的多肽的方法，包括：

(a)在有助于所述多肽產生的條件下培養權利要求5的宿主細胞；和

(b)回收所述多肽。

8.一種轉基因植物、植物部分或植物細胞，其用編碼段權利要求1或2的多肽的多核苷酸轉化。

9.一種產生具有纖維二糖水解酶活性的多肽的方法，包括：

(a)在有助于所述多肽的產生的條件下培養權利要求8的轉基因植物或植物細胞；和

(b)回收所述多肽。

10.一種產生親本細胞的突變體的方法，包括使編碼權利要求1或2的多肽的多核苷酸失活，其導致突變體與親本細胞相比產生較少的所述多肽。

11.一種雙鏈抑制性RNA(dsRNA)分子，其包含權利要求4的多核苷酸的亞序列，其中可選地所述dsRNA是siRNA或miRNA分子。

12.一種在細胞中抑制具有纖維二糖水解酶活性的多肽的表達的方法，包括向細胞施用或在細胞中表達權利要求11的雙鏈抑制性RNA(dsRNA)分子。

13.一種分離的多核苷酸，其編碼信號肽，所述信號肽包含SEQ?ID?NO：2的氨基酸1至17或SEQ?ID?NO：4的氨基酸1至17，或由SEQ?ID?NO：2的氨基酸1至17或SEQ?ID?NO：4的氨基酸1至17組成。

14.一種產生蛋白的方法，包括：

(a)在有助于產生所述蛋白的條件下培養重組宿主細胞，所述重組宿主細胞包含編碼蛋白的基因，所述基因可操作地連接于權利要求13的多核苷酸，其中所述基因對于編碼所述信號肽的多核苷酸是外源的；和

(b)回收所述蛋白。

15.一種降解或轉化纖維素材料的方法，包括：在權利要求1或2的具有纖維二糖水解酶活性的多肽的存在下用酶組合物處理所述纖維素材料。

16.權利要求15的方法，進一步包括回收經降解的纖維素材料。