[發(fā)明專利]容易地分離的具有天然免疫球蛋白形式的雙特異性抗體有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201080032565.8 | 申請(qǐng)日： | 2010-06-25 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102471378A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-05-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | S·戴維斯;E·史密斯;D·邁克多納德;K·L·奧森 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 瑞澤恩制藥公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K16/06 | 分類號(hào)： | C07K16/06;C07K16/46 |
| 代理公司： | 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038 | 代理人： | 羅菊華 |
| 地址： | 美國(guó)*** | 國(guó)省代碼： | 美國(guó);US |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 容易 分離 具有 天然 免疫球蛋白 形式 特異性 抗體 | ||
1.異源二聚雙特異性抗原結(jié)合蛋白，其包含：
a.第一多肽，其從N-末端至C-末端包含：選擇性地結(jié)合第一表位的第一表位結(jié)合區(qū)、包含第一CH3區(qū)的免疫球蛋白恒定區(qū)，該第一CH3區(qū)為選自IgG1、IgG2和IgG4的人IgG的CH3區(qū)；和
b.第二多肽，其從N-末端至C-末端包含：選擇性地結(jié)合第二表位的第二表位結(jié)合區(qū)、包含第二CH3區(qū)的免疫球蛋白恒定區(qū)，該第二CH3區(qū)為選自IgG1、IgG2和IgG4的人IgG的第二CH3區(qū)，其中所述第二CH3區(qū)包含減少或消除該第二CH3結(jié)構(gòu)域與A蛋白的結(jié)合的修飾。
2.權(quán)利要求1的雙特異性蛋白，其中所述第一多肽和所述第二多肽為人IgG重鏈。
3.權(quán)利要求1的雙特異性蛋白，其還包含免疫球蛋白輕鏈。
4.權(quán)利要求3的雙特異性蛋白，其中所述免疫球蛋白輕鏈為人免疫球蛋白輕鏈。
5.權(quán)利要求1的雙特異性蛋白，其中所述第一多肽和所述第二多肽中每一個(gè)為人IgG1重鏈。
6.權(quán)利要求1的雙特異性蛋白，其中所述修飾選自IMGT外顯子編號(hào)系統(tǒng)中的(a)95R，和(b)95R和96F，或者EU編號(hào)系統(tǒng)中的(a’)435R，和(b’)435R和436F。
7.權(quán)利要求6的雙特異性蛋白，其還包含1至5個(gè)選自下列的修飾：IMGT外顯子編號(hào)系統(tǒng)中的16E、18M、44S、52N、57M和82I，或者EU編號(hào)系統(tǒng)中的356E、358M、384S、392N、397M和422I。
8.權(quán)利要求6的雙特異性蛋白，其中所述雙特異性抗體的CH3結(jié)構(gòu)域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。
9.權(quán)利要求7的雙特異性蛋白，其中所述雙特異性抗體的CH3結(jié)構(gòu)域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。
10.制備雙特異性抗體的方法，其包括：
a.獲得核酸序列，其編碼包含識(shí)別第一表位的第一可變結(jié)構(gòu)域的第一免疫球蛋白重鏈，其中所述第一免疫球蛋白重鏈包含IgG1、IgG2或IgG4同種型恒定結(jié)構(gòu)域；
b.獲得第二核酸序列，其編碼包含識(shí)別第二表位的第二可變結(jié)構(gòu)域的第二免疫球蛋白重鏈，其中所述第二免疫球蛋白重鏈包含IgG1、IgG2或IgG4同種型恒定結(jié)構(gòu)域，所述IgG1、IgG2或IgG4同種型恒定結(jié)構(gòu)域在其CH3結(jié)構(gòu)域中包含根除或減少與A蛋白的結(jié)合的修飾；
c.獲得第三核酸序列，其編碼與所述第一和第二免疫球蛋白重鏈配對(duì)的免疫球蛋白輕鏈；
d.將所述第一、第二和第三核酸序列引入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中；
e.讓所述細(xì)胞表達(dá)雙特異性抗體；和
f.基于該雙特異性抗體結(jié)合A蛋白的能力來(lái)分離所述雙特異性抗體。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述修飾選自IMGT外顯子編號(hào)系統(tǒng)中的(a)95R，和(b)95R和96F，或者EU編號(hào)系統(tǒng)中的(a’)435R，和(b’)435R和436F。
12.權(quán)利要求11的方法，其還包括1至5個(gè)選自下列的修飾：IMGT外顯子編號(hào)系統(tǒng)中的16E、18M、44S、52N、57M和82I，或者EU編號(hào)系統(tǒng)中的356E、358M、384S、392N、397M和422I。
13.權(quán)利要求11的方法，其中所述雙特異性抗體的CH3結(jié)構(gòu)域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。
14.權(quán)利要求12的方法，其中所述雙特異性抗體的CH3結(jié)構(gòu)域在人中是非免疫原性的或基本上非免疫原性的。
15.權(quán)利要求10的方法，其中在包含A蛋白的固體支持物上分離所述雙特異性抗體。
16.權(quán)利要求15的方法，其中所述固體支持物包括A蛋白親和柱，并且使用pH梯度來(lái)分離所述雙特異性抗體。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述pH梯度為包含一個(gè)或多個(gè)位于pH?3和pH?5之間的pH階梯的階梯式梯度。
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