[發明專利]純化蛋白復合物的方法

有效

• 申請號: 201080031703.0
• 申請日: 2010-06-21
• 公開（公告）號: CN102458460B
• 公開（公告）日: 2018-01-30
• 發明（設計）人: 卡米洛·科拉科;科林·理查德·比格內爾
• 申請（專利權）人: 免疫生物學有限公司
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K39/385;C07K1/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司11262
• 代理人: 申基成,鄭霞

1.一種用于純化應激蛋白和多肽之間形成的復合物的方法，所述方法包括以下步驟：

(i)提供源混合物，所述源混合物包括由與多肽復合的應激蛋白形成的至少一種靶應激蛋白復合物，

(ii)確定待從所述源混合物純化的所述至少一種靶應激蛋白復合物的等電點(pI)；

(iii)從包括所鑒定的應激蛋白復合物的所述源混合物制備澄清的細胞裂解物；

(iv)使步驟(iii)的所述澄清的細胞裂解物經受利用離子交換的純化，其中在離子交換過程中所述澄清的細胞裂解物被包括至少一種二價陽離子的第一緩沖液緩沖至所述靶應激蛋白復合物的pI的2個單位內的pH，并且其中使用提供鹽梯度的第二緩沖液來洗脫靶應激蛋白復合物的混合物。

2.如權利要求1所述的方法，其中被洗脫的靶應激蛋白復合物以制備物提供，所述制備物包括不同熱休克蛋白種類的多個應激蛋白。

3.如權利要求1或權利要求2所述的方法，其中步驟(iv)的第一緩沖液還包括二磷酸腺苷。

4.如權利要求3所述的方法，其中所述二磷酸腺苷以從0.1mM至100mM的濃度來提供，并且其中所述二價陽離子以0.1mM至100mM的濃度來提供。

5.如權利要求1或2所述的方法，其中所述至少一種二價陽離子是鎂鹽和/或錳鹽。

6.如權利要求1或2所述的方法，其中所述第一緩沖液缺少三磷酸腺苷(ATP)、ATP酶、和/或鉀或鉀鹽中的至少一種。

7.如權利要求1或2所述的方法，其中所述第一緩沖液不包括離液劑、表面活性劑、尿素或兩性電解質。

8.如權利要求1或2所述的方法，其中所述第二緩沖液是提供鹽梯度的洗脫緩沖液。

9.如權利要求8所述的方法，其中所述洗脫緩沖液包括氯化鈉。

10.如權利要求9所述的方法，其中所述氯化鈉以50mM至500mM的濃度在所述洗脫緩沖液中被提供。

11.如權利要求8所述的方法，其中所述洗脫緩沖液的pH從pH3至pH10。

12.如權利要求8所述的方法，其中所述洗脫緩沖液的pH從pH4至pH9。

13.如權利要求8所述的方法，其中所述洗脫緩沖液的pH為pH6.8。

14.如權利要求1或2所述的方法，其中所述離子交換是離子交換色譜。

15.如權利要求1或2所述的方法，其中所述離子交換是陽離子交換色譜。

16.如權利要求1或2所述的方法，其中所述離子交換是陰離子交換色譜。

17.如權利要求1或2所述的方法，其中所述離子交換是混合型色譜。

18.如權利要求1或2所述的方法，其中所述離子交換利用離子交換膜吸附器來進行，所述離子交換膜吸附器用來將復合蛋白混合物分成堿性級分和酸性級分。

19.如權利要求1或2所述的方法，其中所述離子交換的固相是樹脂或膜。

20.如權利要求1或2所述的方法，其中所述應激蛋白復合物被洗脫在包括具有4.5至6.5的pI的復合物的級分中。

21.如權利要求16所述的方法，其中所述陰離子交換色譜在從5.0至9.0的pH下和從0.5mS/cm至5mS/cm的電導率下進行。

22.如權利要求15所述的方法，其中所述陽離子交換色譜在從4.0至9.0的pH下和從0.5mS/cm至15mS/cm的電導率下進行。

23.如權利要求1或2所述的方法，其中所述應激蛋白是熱休克蛋白。

24.如權利要求18所述的方法，其中所述復合蛋白混合物包括選自由以下組成的組的一個或多個熱休克蛋白：hsp20-30kD、hsp40、hsp60、hsp70、hsp90、hsp100、鈣網織蛋白、hsp72、grp94、grp75BiP/grp78、grp75/mt和gp96。