[發明專利]控制抗體的O-聯糖基化的方法

有效

• 申請號: 201080030803.1
• 申請日: 2010-05-07
• 公開（公告）號: CN102459330A
• 公開（公告）日: 2012-05-16
• 發明（設計）人: L.R.埃文斯;M.休斯;J.海;D.斯里普;D.J.圖思;N.多茲沃思;M.J.薩克斯頓;J.P.瓦特斯;S.阿思瓦爾
• 申請（專利權）人: 諾維信生物制藥丹麥公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 史悅

1.一種用于制備包含抗體序列的多肽的方法，所述多肽具有低O-聯糖基化程度，包括以下步驟：

a.提供編碼包含抗體序列的多肽的核酸序列；

b.修飾所述核酸序列從而取代或缺失選自S、T和Y并且受到O-聯糖基化的至少一個氨基酸殘基；

c.將所述修飾的核酸序列導入合適的宿主細胞從而使所述修飾的核酸序列能夠在所述宿主細胞中得到表達；

d.將所述宿主細胞在導致由所述修飾的核酸序列編碼的多肽表達的條件下培養，并且

e.回收所述多肽。

2.權利要求1的方法，其中所述抗體序列包含框架序列。

3.權利要求1或2的方法，其中所述多肽選自抗體、其片段或變體、或包含抗體、其片段或變體的融合蛋白。

4.根據權利要求1-3中任一項的方法，其中所述受到O-聯糖基化的至少一個氨基酸殘基選自根據Kabat編號具有以下位置的氨基酸：L56和對應于SEQ?ID?NO：12中位置7、72、191或206的位置的氨基酸。

5.權利要求4的方法，其中將根據Kabat編號編為L56的氨基酸用選自G、A、V的另一氨基酸取代。

6.根據前述權利要求中任一項的方法，其中所述宿主細胞是真菌宿主細胞。

7.權利要求6的方法，其中所述宿主細胞選自：曲霉屬菌種(Aspergillus?sp.)，如構巢曲霉(A.nidulans)、黑曲霉(A.niger)、泡盛曲霉(A.awamori)和米曲霉(A.oryzae)；木霉屬菌種(Trichoderma?sp.)，如里氏木霉(T.reeseii)、長枝木霉(T.Longibrachiatum)和綠色木霉(T.virdee)；青霉屬菌種(Penicillum?sp.)如特異青霉(P.notatum)和產黃青霉(P.chrysogenum)；梭鏈孢屬菌種(Fusidium?sp.)、鐮孢屬菌種(Fusarium?sp.)、裂褶菌屬菌種(Scizophyllum?sp.)、毛霉屬菌種(Mucor?sp)、根霉屬菌種(Rhizopus?sp.)、酵母屬菌種(Saccharomyces?sp.)如釀酒酵母(S.cerevisiae)和葡萄汁酵母(S.ovarum)、接合酵母屬菌種(Zygosaccharomyces?sp.)、裂殖酵母屬菌種(Schizosaccharomyces?sp.)如粟酒裂殖酵母(S.pombe)、克魯維酵母屬菌種(Klyveromyces?sp.)如乳酸克魯維酵母(K.lactis)、假絲酵母屬菌種(Candida?sp.)如白色假絲酵母(C.albicans)、畢赤酵母屬菌種(Pichia?sp.)和漢遜酵母屬菌種(Hansenula?sp)。

8.權利要求7的方法，其中所述宿主細胞選自釀酒酵母、粟酒裂殖酵母、乳酸克魯維酵母、巴斯德畢赤酵母(Pichia?pastoris)、構巢曲霉、黑曲霉、米曲霉和里氏木霉。

9.能夠根據權利要求1的方法獲得的多肽。

10.一種包含根據權利要求1-5中任一項的方法制備的多肽的組合物。

11.權利要求10的組合物，其中所述多肽是抗體、其片段或變體、或包含抗體、其片段或變體的融合蛋白。