[發明專利]一種新型真菌蛋白酶及其用途

有效

• 申請號: 201080030241.0
• 申請日: 2010-04-30
• 公開（公告）號: CN102625843A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: L·瓦爾塔卡里;K·瓊圖南;S·馬基南;J·卡利奧;J·維馬安佩拉;P·奧賈帕洛;M·帕洛海莫
• 申請（專利權）人: 生化酶股份有限公司
• 主分類號: C12N15/80
• 分類號: C12N15/80;C07K14/37
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李進;林森

1.一種真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶具有絲氨酸蛋白酶活性，并包含如SEQ?ID?NO：15定義的成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列或與SEQ?ID?NO：15定義的成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列具有至少86％同一性的氨基酸序列。

2.根據權利要求1的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶可自木賊鐮孢獲得。

3.根據權利要求1或2的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶具有絲氨酸蛋白酶活性，并包含氨基酸序列SEQ?ID?NO：15。

4.根據權利要求1-3中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶的成熟形式具有在20-35kDa之間的分子質量。

5.根據權利要求1-4中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，在pH?9使用15min反應時間以及酪蛋白作為底物，所述酶的最適溫度為30℃-70℃。

6.根據權利要求1-5中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，在50℃使用15min反應時間以及酪蛋白作為底物，所述酶的最適pH在至少pH?6-pH?11的pH范圍。

7.根據權利要求1-6中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，在存在洗滌劑的情況下于10℃-60℃之間，所述酶能夠降解和去除蛋白質污跡。

8.根據權利要求1-7中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由分離的多核苷酸序列編碼，所述多核苷酸序列在嚴格條件下與包含在質粒pALK2521中的多核苷酸序列雜交，所述質粒包含核苷酸序列SEQ?ID?NO：9，保藏在檢索號為DSM?22171的大腸桿菌RF7664中。

9.根據權利要求1-8中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由分離的多核苷酸序列編碼，所述多核苷酸序列編碼以下多肽，其包含如SEQ?ID?NO：15定義的成熟Fe_RF6318酶的氨基酸序列或與SEQ?ID?NO：15定義的成熟Fe_RF6318的氨基酸序列具有至少86％同一性的氨基酸序列。

10.根據權利要求1-9中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由分離的核酸分子編碼，所述核酸分子編碼包含在SEQ?ID?NO：15中表征的氨基酸序列的多肽。

11.根據權利要求1-10中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由包含核苷酸序列SEQ?ID?NO：14的分離核酸分子編碼。

12.根據權利要求1-11中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由包含在pALK2529中的多核苷酸序列編碼，pALK2529保藏在檢索號為DSM?22172的大腸桿菌RF7800中。

13.根據權利要求1-12中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶由重組表達載體產生，所述重組表達載體包含編碼根據權利要求1-12中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶的核酸分子，所述核酸分子可操作地連接到能夠在適宜宿主中指導絲氨酸蛋白酶編碼基因表達的調控序列。

14.根據權利要求1-13中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在異源宿主中產生。

15.根據權利要求1-14中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在微生物宿主中產生。

16.根據權利要求1-15中任一項的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在下列屬的宿主中產生：木霉、曲霉、鐮孢、腐質霉、金孢子菌、脈孢菌、根霉、青霉和被孢霉。

17.根據權利要求16的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在木霉或曲霉中產生。

18.根據權利要求17的真菌絲氨酸蛋白酶，其特征在于，所述酶在里氏木霉中產生。