[發(fā)明專利]血液成分的分離系統(tǒng)、分離材料

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080029525.8
• 申請日: 2010-06-28
• 公開（公告）號: CN102471762A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發(fā)明（設計）人: 佐藤伸彥;吉田進也;小林明;中谷勝
• 申請（專利權）人: 株式會社鐘化
• 主分類號: C12N5/078
• 分類號: C12N5/078;C12N5/0775;C12N5/0789;C12N5/0786;C12M1/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張永新

技術領域

本發(fā)明涉及從包含各血細胞成分的體液中分離出紅細胞富集級分、白細胞富集級分、和/或血小板富集級分的方法。此外，本發(fā)明還涉及能夠?qū)Π准毎械摹⒂绕涫前煅杉毎膯魏思毎患壏诌x擇地進行回收的分離材料、分離方法。

背景技術

近年來，伴隨著血液學、科學技術的快速進步，從以全血、骨髓、臍帶血、組織提取物為代表的體液中，僅分離對于治療而言必要的血液級分并給予患者，而不給予不必要的級分，從而進一步提高治療效果、抑制副作用的治療方式得到廣泛普及。

例如，血液輸血也是其中的一種。紅細胞制劑是在出血及紅細胞不足的狀態(tài)、或紅細胞的功能降低導致氧缺乏的情況下使用的血液制劑。為此，引發(fā)異常的免疫反應、移植物抗宿主病(GVHD)等副作用的白細胞是不需要的，有時需要利用過濾器除去白細胞。根據(jù)情況，有時除了白細胞之外，還需要除去血小板。

另一方面，血小板制劑是在由于缺乏凝血因子而導致的出血乃至具有出血傾向的患者中使用的血液制劑。通過離心分離，除去血小板以外的不需要的細胞、成分，僅采集必要的血小板成分。

除此之外，近年來，面向白血病、實體癌治療的造血干細胞移植日益盛行，逐漸形成分離出治療所必須的細胞(白細胞，尤其是單核細胞)來給予的模式。作為該造血干細胞的來源，從對供體的負擔小、增殖能力優(yōu)異等優(yōu)點來看，除了骨髓和末梢血之外，臍帶血也廣泛受到關注。此外近年來，還有顯示在月經(jīng)血中也存在豐富的干細胞，到目前為止被廢棄的月經(jīng)血也可能作為貴重的干細胞來源使用。

關于骨髓和末梢血，期望除去不需要的細胞，分離、純化白細胞(尤其是單核細胞)并給予，另一方面，為了親緣關系者的臍帶血銀行(banking)也逐漸盛行，由于直到使用前都需要冷凍保存，因此出于防止由冷凍保存導致的紅細胞溶血的目的，將白細胞分離并純化。

提出了如下的分離方法：借助使用聚蔗糖的比重液的離心分離法，以及使用作為紅細胞沉降劑的羥乙基淀粉的離心分離法，但其存在著無法在封閉體系中進行處理從而混入雜質(zhì)和菌這樣的問題。作為不使用離心分離法的細胞分離方法，最近還報道了如下方法：使用不捕捉紅細胞和血小板，僅捕捉白細胞的過濾材料，對白細胞進行回收的方法(專利文獻1、專利文獻2)，在該方法中，無法將紅細胞和血小板分離。

目前存在的狀況是，根據(jù)目標成分而采用不同的分離方法，紅細胞制劑采用分離過濾器，血小板制劑采用離心分離，白細胞制劑采用使用比重液、紅細胞沉降劑的離心分離。原本，由于紅細胞、血小板、白細胞可以從血液、骨髓、臍帶血等相同的來源獲得，因此利用以往的分離方法會使必要的細胞被浪費。由此，期望用于對來自相同來源的紅細胞、白細胞、血小板進行分離的不需要復雜操作，并能夠迅速實現(xiàn)的分離技術。

此外，期望進一步提高白細胞尤其是含有造血干細胞的單核細胞級分的純度，但在現(xiàn)在的技術中，粒細胞的混入率仍然較高，需要比目前更進一步地降低粒細胞的混入率(非專利文獻1)。

此外，已知作為由過濾器捕捉的白細胞、單核細胞進行回收的溶液，如果使用含葡聚糖的高粘度溶液，可以提高白細胞、單核細胞的回收率(專利文獻2)，但另一方面，存在以下問題：由于在該方法中使用的葡聚糖溶液粘度高，因此利用注射器壓出時操作困難，期待著如下的容易利用注射器回收并且可高收率地回收白細胞、單核細胞的分離溶液。

現(xiàn)有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特表2001-518792

專利文獻2：國際公開號WO98/32840

非專利文獻

非專利文獻1：TRANSFUSION，Vol.45，p1899-1908，2005

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明要解決的問題

本發(fā)明的目的在于提供一種不需要離心操作，可迅速且簡便地從含有各血細胞成分的體液中分離出紅細胞富集級分、白細胞富集級分、血小板富集級分的方法。進一步地，本發(fā)明還提供一種可以獲得白細胞尤其是粒細胞的混入率低的單核細胞富集級分的分離材料和分離方法。

解決問題的方法

本發(fā)明人等對以往難以容易實現(xiàn)的、不需要離心操作即可從體液中分離各血細胞成分的方法進行了深入的研究，結果發(fā)現(xiàn)：通過使用某種血細胞分離材料，首先將白細胞和血小板捕捉于分離材料從而得到紅細胞富集級分，然后使用分離溶液，將捕捉于血細胞分離材料的白細胞回收從而得到白細胞富集級分，由此可以從體液中分離出紅細胞富集級分、白細胞富集級分、血小板富集級分，從而完成了本發(fā)明。