[發明專利]用于抗微生物劑抗性測定的方法

有效

• 申請號: 201080028598.5
• 申請日: 2010-05-06
• 公開（公告）號: CN102460172A
• 公開（公告）日: 2012-05-16
• 發明（設計）人: 約翰·沃爾什;瓊斯·海曼
• 申請（專利權）人: 生物梅里埃有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 申基成;鄭霞

1.一種用于測定微生物的抗生素抗性狀況的方法，所述方法包括：

(a)在可形成微生物/抗性測定親和配體復合物的條件下，將所述微生物與抗性測定親和配體相接觸；

(b)將(a)中形成的微生物/抗性測定親和配體復合物與未結合的抗性測定親和配體相分離；

(c)測定所述微生物/抗性測定親和配體復合物中與所述微生物結合的抗性測定親和配體的量；和

(d)將所述微生物/抗性測定親和配體復合物中與所述微生物結合的抗性測定親和配體的量與被同樣的微生物的已知的抗生素敏感性或抗生素抗性菌株或已知的抗生素敏感性或抗生素抗性菌株的群體所結合的抗性測定親和配體的量相比較；

其中如果所述微生物/抗性測定親和配體復合物中的所述微生物結合的抗性測定親和配體的量與所述抗生素敏感性微生物結合的抗性測定親和配體的量不同，或所述微生物/抗性測定親和配體復合物中的所述微生物結合的抗性測定親和配體的量與所述抗生素抗性微生物結合的抗性測定親和配體的量相同，那么所述微生物被鑒定為抗生素抗性的。

2.如權利要求1所述的方法，其中步驟(a)、(b)、(c)和/或(d)中的一個或多個在密封的容器中進行。

3.如權利要求1所述的方法，其中所述抗性測定親和配體選自由以下組成的組：抗生素，單克隆抗體和多克隆抗體及其片段，核酸探針，酶底物，適體，肽模擬物，噬菌體來源的結合蛋白，凝集素，宿主防御肽，細菌素，噬菌體，對核酸、脂質、碳水化合物、多糖、蛋白選擇性的染料，和其組合。

4.如權利要求1所述的方法，其中所述抗性測定親和配體是抗生素。

5.如權利要求1所述的方法，其中所述抗性測定親和配體是β-內酰胺抗生素或糖肽抗生素。

6.如權利要求1所述的方法，其中所述抗性測定親和配體包括可檢測的標記物。

7.如權利要求6所述的方法，其中所述可檢測的標記物是熒光的、發光的、發磷光的、放射性的、拉曼活性的、質譜反應性的和/或比色的化合物標記物。

8.如權利要求1所述的方法，其中所述微生物在臨床或非臨床樣品中。

9.如權利要求8所述的方法，其中所述樣品來自陽性血液培養物。

10.如權利要求1所述的方法，其中在分離步驟(b)之前對包括所述微生物的樣品進行處理以選擇性地裂解可能存在于所述樣品中的任何非微生物細胞。

11.如權利要求1所述的方法，其中所述微生物被層疊在容器中的密度墊層上并且分離步驟(b)是通過離心所述容器。

12.如權利要求11所述的方法，其中所述密度墊層包括以下物質的一種或多種的任何組合：顯微鏡浸油、礦物油、硅油、氟硅油、硅凝膠、膠態二氧化硅、碘化造影劑、蔗糖、甲泛影酸鹽-泛影酸鹽-葡聚糖、羧甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚氧化乙烯(高分子量)、F127、F68、聚丙烯酸、交聯的聚乙烯醇、交聯的聚乙烯吡咯烷、PEG甲醚甲基丙烯酸酯、果膠、瓊脂糖、黃原膠、吉蘭糖、山梨糖醇、甘油、葡聚糖、糖原、氯化銫、全氟化碳液體、和/或氫氟碳液體。

13.如權利要求11所述的方法，其中所述密度墊層具有約1.025g/ml至約1.120g/ml的密度。

14.如權利要求11所述的方法，其中所述容器包括在所述容器的底部、頂部和/或一個或多個側部的光學窗口，并且其中所述光學窗口可透過近紅外光譜、紫外光譜和/或可見光譜中的至少一部分。

15.如權利要求1所述的方法，其中所述測定步驟(c)包括光譜學。

16.如權利要求15所述的方法，其中所述光譜學選自由以下組成的組：熒光光譜學、漫反射光譜學、吸收和透射光譜學、紅外光譜學、太赫茲光譜學、拉曼光譜學、表面增強拉曼光譜學、空間偏移拉曼光譜學、共振拉曼光譜學，和其任何組合。

17.如權利要求15所述的方法，其中所述光譜學是正面熒光光譜學。

18.如權利要求15所述的方法，其中所述光譜學包括測定激發-發射矩陣(EEM)。