[發明專利]用于人多潛能干(hPS)細胞的生長和分化的3D培養系統

有效

• 申請號: 201080026712.0
• 申請日: 2010-06-18
• 公開（公告）號: CN102459574A
• 公開（公告）日: 2012-05-16
• 發明（設計）人: H·施塔赫爾沙伊德;K·蔡林格;J·延森;T·厄巴尼亞克
• 申請（專利權）人: 塞拉提斯股份公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12M3/04;C02F3/12
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.用于獲得肝細胞樣細胞的方法，所述方法包括

i)在生物反應器中接種hPS或肝前體細胞；

ii)用一種或多種培養基灌注生物反應器，進行10至50天的時間段，以獲得肝細胞樣細胞。

2.權利要求1的方法，其中所述肝細胞樣細胞以包含肝細胞樣細胞的肝組織樣3D結構的形式存在。

3.權利要求1或2的方法，其中所述hPS細胞是人胚胎干細胞。

4.權利要求1或2的方法，其中所述hPS細胞是誘導的多潛能干(iPS)細胞。

5.權利要求1或2的方法，其中所述肝細胞前體細胞是定型內胚層(DE)。

6.權利要求1或2的方法，其中所述肝細胞前體細胞不是定型內胚層(DE)。

7.權利要求1或2的方法，其中所述肝細胞前體細胞具有胎兒內胚層的特征。

8.權利要求1或2的方法，其中所述肝細胞前體細胞具有肝內胚層的特征。

9.前述權利要求的任一項的方法，其中所述生物反應器是中空纖維毛細管生物反應器。

10.前述權利要求的任一項的方法，其中所述生物反應器提供有膜區室。

11.權利要求10的方法，其中所述膜區室包括兩個或更多個毛細管系統以及一個或多個中空纖維膜。

12.權利要求9至11的任一項的方法，其中所述生物反應器包括用于灌注培養基通過毛細管系統的工具和用于在毛細管系統中進行氣體交換的工具。

13.權利要求9至12的任一項的方法，其中生長培養基的灌注通過毛細管系統發生，并且氣體交換通過中空纖維膜系統發生。

14.權利要求9至13的任一項的方法，其中所述毛細管系統和一個或多個中空纖維膜經配置形成整合在室中的獨立的交織的纖維毛細管膜系統。

15.前述權利要求的任一項的方法，其中在步驟i)中接種hPS細胞，并且按照下列方案進行灌注：

條件是，包括步驟2-6中的至少3個步驟。

16.權利要求15的方法，其中包括所有步驟。

17.權利要求15或16的任一項的方法，其中培養基DM-A包含生長培養基和一種或多種如下成分：激活蛋白A、bFGF、Glutamax-I。

18.權利要求15-17的任一項的方法，其中所述培養基DM-A包含激活蛋白-A和bFGF。

19.權利要求15-18的任一項的方法，其中所述培養基DM-B包含生長培養基例如RPMI?Advanced培養基等，和一種或多種如下成分：激活蛋白A、bFGF、GLutamax-I、FCS。

20.權利要求15-19的任一項的方法，其中所述培養基DM-B包含激活蛋白-A和bFGF。

21.權利要求15-20的任一項的方法，其中培養基DM-C包含生長培養基例如RPMI?Advanced培養基等，和一種或多種如下成分：bFGF、aFGF、BMP2、BMP4、Glutamax-I、FCS。

22.權利要求21的方法，其中所述培養基DM-C包含bFGF、aFGF、BMP2、BMP4。

23.權利要求15-22的任一項的方法，其中培養基DM-D包含肝培養基例如Williams培養基E等，和一種或多種如下成分：BSA、抗壞血酸、Glutamax-I、D-半乳糖/D-山梨醇、氫化可的松、胰島素、轉鐵蛋白、bFGF、EGF、HGF。

24.權利要求23的方法，其中所述培養基DM-D包含BSA、抗壞血酸、D-半乳糖/D-山梨醇、氫化可的松、胰島素、轉鐵蛋白、bFGF、EGF、HGF。