[發明專利]微小RNA-199b-5p在醫學和診斷領域中的應用

有效

• 申請號: 201080023615.6
• 申請日: 2010-03-23
• 公開（公告）號: CN102482669A
• 公開（公告）日: 2012-05-30
• 發明（設計）人: M·佐洛
• 申請（專利權）人: 先進加速器申請公司
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;A61K31/713;C12Q1/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 崔佳佳

1.包含以下序列或由其構成的寡核苷酸序列：

CCAGAGGACACCTCCACTCCGTCTACCCAGTGTTTAGACTATCTGTTCAGGACTCCCAAATTGTACAGTAGTCTGCACATTGGTTAGGCTGGGCTGGGTTAGACCCTCGG(SEQ?ID?No：1)

或包含相應核糖核苷酸序列或由其構成：

CCAGAGGACACCUCCACUCCGUCUACCCAGUGUUUAGACUAUCUGUUCAGGACUCCCAAAUUGUACAGUAGUCUGCACAUUGGUUAGGCUGGGCUGGGUUAGACCCUCGG(SEQ?ID?No：10)

或包含SEQ?ID?No：10的一部分或由其構成：

CCCAGUGUUUAGACUAUCUGUUC(SEQ?ID?NO：11)，

用于治療和/或預防特征在于基因CD133表達的腫瘤，所述腫瘤選自：髓母細胞瘤、淋巴瘤、成膠質細胞瘤、結腸癌和乳腺癌。

2.如權利要求1所述的序列，其特征在于，通過病毒載體或通過SNALP技術、LNA技術攜帶或具有通過C_1-7接頭結合膽固醇分子作修飾的O-2-甲基。

3.如權利要求2所述的序列，其特征在于，所述病毒載體是腺病毒載體。

4.如權利要求3所述的序列，其特征在于，所述腺病毒載體是具有圖16所示基因組圖譜序列的AdV5載體，所述載體由含CMV啟動子的6217bp構成，其中由SEQ?ID?NO：1構成或包含其的序列克隆入XhoI/HindIII限制性位點。

5.一種體外診斷方法，通過檢測生物學樣品中包含SEQ?ID?NO：1或由其構成的序列以及在癌癥干細胞中表達的一種或多種基因的表達來評估腫瘤的組織病理學階段和是否存在轉移，所述基因選自：CD133、c-myc、nanog、oct4、TCFL1、ZIC1、KLF5、HMGA1、HMGB3。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，通過實時PCR來檢測包含SEQID?NO：1或由其構成的序列的表達，利用以下擴增引物：

正向引物：CGGGAATTCCCAGAGGACACCTCCAC(SEQ?ID?NO：3)

反向引物：CGGCTCGAGCCGAGGGTCTAACCCAG(SEQ?ID?NO：4)

和一對對照引物以用于標準化序列的表達值。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，用于標準化所述序列的表達值的對照引物是：

正向引物：GAA?AAG?CCT?TGT?TTG?TGC?TTG?C(SEQ?ID?NO：5)

反向引物：GGG?CCA?TGC?TAA?TCT?TCT?CTG?T(SEQ?ID?NO：6)。

8.如權利要求5所述的方法，其特征在于，檢測包含SEQ?ID?NO：1或由其構成的序列的表達，包括以下步驟：

a)逆轉錄所述RNA；和b)利用以下引物和探針序列，通過TaqMan試驗表達所述序列：

正向引物：AGGACACCTCCACTCCGTCTAC(SEQ?ID?NO：7)

反向引物：GCCTAACCAATGTGCAGACTACTG(SEQ?ID?NO：8)

探針：CAGTGTTTAGACTATCTGTTCAGGACTCCCAAATTG(SEQ?ID?NO：9)。