[發(fā)明專利]采用Axl作為上皮?間質(zhì)轉(zhuǎn)化的生物標(biāo)志物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080020766.6
• 申請(qǐng)日: 2010-03-01
• 公開（公告）號(hào): CN102421919B
• 公開（公告）日: 2017-10-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 詹姆斯·布拉德利·洛倫斯;戴維·羅伯特·米克勒姆;拉爾斯·阿克斯萊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 卑爾根技術(shù)交易股份公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京天昊聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11112
• 代理人: 丁業(yè)平,張?zhí)焓?/td>

1.抗Axl抗體，針對(duì)Axl的核酸探針，和/或至少一種針對(duì)Axl的QPCR引物在制備用于檢測(cè)受試者中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生的試劑盒中的用途。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中Axl為用于檢測(cè)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的誘導(dǎo)的生物標(biāo)志物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中Axl的上調(diào)指示上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生。

4.抗Axl抗體，針對(duì)Axl的核酸探針，和/或至少一種針對(duì)Axl的QPCR引物在制備用于檢測(cè)樣品中的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生的方法中的試劑盒的用途，所述方法包括與對(duì)照樣品相比，確定從細(xì)胞、細(xì)胞群、動(dòng)物模型或人中分離的樣品中Axl的表達(dá)，其中相比于所述對(duì)照樣品，Axl表達(dá)的上調(diào)指示上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述細(xì)胞群為細(xì)胞培養(yǎng)物。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞、PBMC或淋巴細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述樣品為血液。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中所述樣品為血清、血漿或組織培養(yǎng)上清液。

9.一種在體外鑒定能夠抑制或逆轉(zhuǎn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的試劑的方法，所述方法包括將所述試劑施予細(xì)胞或細(xì)胞群，并監(jiān)測(cè)Axl的活性和/或表達(dá)，

其中所述方法包括下列步驟：

(i)將所述試劑與Axl受體或表達(dá)所述Axl受體的細(xì)胞接觸；

(ii)在所述試劑的存在下測(cè)量所述Axl受體的活性；以及

(iii)將步驟(ii)中測(cè)得的所述活性與在對(duì)照條件下測(cè)得的活性相比較，其中活性降低表明所述試劑能夠抑制或逆轉(zhuǎn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，該方法包括：

(i)將所述試劑施予細(xì)胞或細(xì)胞群；以及

(ii)測(cè)量來源于已處理和未處理的細(xì)胞、或細(xì)胞群的樣品中的Axl表達(dá)；以及

(iii)檢測(cè)所述已處理樣品中的Axl表達(dá)相比于所述未處理樣品的增加或減少，作為抑制或逆轉(zhuǎn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的能力的指標(biāo)。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中通過蛋白分析對(duì)所述樣品進(jìn)行分析。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述蛋白分析通過ELISA、PET、流式細(xì)胞術(shù)、SELDI-TOF MS或2-D PAGE進(jìn)行。

13.根據(jù)權(quán)利要求9-12中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述細(xì)胞群為細(xì)胞培養(yǎng)物。

14.根據(jù)權(quán)利要求9-12中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞、PBMC或淋巴細(xì)胞。

15.根據(jù)權(quán)利要求10-12中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述樣品為血液。

16.根據(jù)權(quán)利要求10-12中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述樣品為血清、血漿或組織培養(yǎng)上清液。

17.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中測(cè)得的所述活性是所述Axl受體的底物的酪氨酸磷酸化程度。

18.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中測(cè)得的所述活性是所述Axl受體的自磷酸化程度。

19.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述接觸步驟(i)中的所述細(xì)胞已經(jīng)預(yù)先被所述Axl基因轉(zhuǎn)染。

20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述的轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的。

21.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中步驟(iii)中的所述對(duì)照條件包括將所述試劑與不含活性Axl基因的細(xì)胞接觸。

22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述細(xì)胞具有所述Axl基因的突變失活形式。

23.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中所述Axl受體包括胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的生物學(xué)活性部分。

24.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述Axl受體為固定化的。