[發(fā)明專利]對抗、預(yù)防和/或測定心力衰竭或心力衰竭的風(fēng)險(xiǎn)的工具和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080018687.1
• 申請日: 2010-04-29
• 公開（公告）號: CN102421917A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: E·E·J·M·克里莫斯;Y-M·品托;A·J·M·迪吉森
• 申請（專利權(quán)）人: 阿姆斯特丹大學(xué)學(xué)術(shù)醫(yī)學(xué)中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/113;A61K31/7105
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 李程達(dá)

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。更具體而言，本申請涉及用于診斷和治療心力衰竭的miRNA。

背景技術(shù)

微RNA(miRNA)是植物和動物的基因組中編碼的小RNA。它們存在于編碼蛋白的基因的內(nèi)含子中、編碼多個(gè)miRNA的多順反子轉(zhuǎn)錄物中和單個(gè)miRNA基因中。這些長度為大約21-23個(gè)核苷酸的高度同源的RNA通常通過結(jié)合特定mRNA的3’-非翻譯區(qū)(3’-UTR)而調(diào)節(jié)基因的表達(dá)。人們認(rèn)為每個(gè)miRNA調(diào)節(jié)多個(gè)基因，由于據(jù)預(yù)測在高等真核生物中存在數(shù)百種miRNA基因，所以miRNA所賦予的潛在的調(diào)節(jié)線路是巨大的。數(shù)個(gè)研究小組已經(jīng)提供了證據(jù)證明miRNA是多種過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者，如早期發(fā)育、細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡、調(diào)亡和脂肪代謝，以及細(xì)胞分化。據(jù)推論：在高等真核生物中，miRNA在調(diào)節(jié)基因表達(dá)中的作用可能與轉(zhuǎn)錄因子同樣重要。目前已經(jīng)驗(yàn)證了超過540種人類的miRNA；然而，計(jì)算機(jī)模型提示可能還有數(shù)千種。人們相信多達(dá)30％的人類基因受到miRNA的調(diào)節(jié)。

編碼miRNA的基因是通過RNA聚合酶II從DNA轉(zhuǎn)錄而來的，但不翻譯成蛋白質(zhì)。初級轉(zhuǎn)錄物一般具有數(shù)千堿基的長度，被稱作pri-miRNA。pri-miRNA在細(xì)胞核中被加工為較短的70-100個(gè)核苷酸的莖-環(huán)結(jié)構(gòu)，其被稱作pre-miRNA。該過程在動物中是通過RNA酶III核酸內(nèi)切酶Drosha進(jìn)行的。然后，pre-miRNA被轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞質(zhì)，在那里它們被第二種RNA酶III核酸內(nèi)切酶DICER加工為長度為21-23個(gè)核苷酸的雙鏈miRNA。隨后，miRNA雙鏈體的一條鏈被摻入到RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC)中。作為RISC的一部分，靶基因的基因表達(dá)通過抑制翻譯和/或通過切割mRNA而被阻抑。成熟的miRNA與一種或多種mRNA分子部分互補(bǔ)。如果miRNA和mRNA在同一細(xì)胞中表達(dá)，則它們能夠以序列特異性方式雜交，從而阻止mRNA翻譯成蛋白質(zhì)，因此調(diào)節(jié)特定蛋白質(zhì)的水平。

miRNA作為可能的臨床參與者的關(guān)注和信賴水平可由下列事實(shí)證明：最近已經(jīng)建立起了多個(gè)基于miRNA的生物技術(shù)公司。

數(shù)種miRNA與癌癥和心臟疾病相關(guān)。表達(dá)分析研究揭示：相對于正常組織，腫瘤中的miRNA表達(dá)是紊亂的。在乳腺癌、肺癌和結(jié)腸癌中，微RNA下調(diào)；而在Burkitt氏和其它人類B-細(xì)胞淋巴瘤中，微RNA上調(diào)。因此，人miRNA可能作為生物標(biāo)志物有很大的用途，尤其是用于將來的癌癥診斷，并且正迅速成為疾病干預(yù)的受關(guān)注的靶標(biāo)。除了它們與癌癥的關(guān)聯(lián)之外，微RNA在控制心臟功能和紊亂的多個(gè)方面具有重要作用，包括肌細(xì)胞生長、心室壁的完整性、收縮性、基因表達(dá)和心律的維持。已經(jīng)證明miRNA的表達(dá)失調(diào)對于多種形式的心臟疾病是必要的和足夠的。

最近描述了miRNA也存在于血液中。在血清、血漿、血小板、紅細(xì)胞以及有核血細(xì)胞中可以檢測到相對高水平的數(shù)種miRNA。已經(jīng)描述了具有鐮狀細(xì)胞貧血或前列腺癌的受試者的血液中的miRNA的異常表達(dá)譜。

雖然已經(jīng)確定遺傳因素與易于發(fā)生心力衰竭的傾向相關(guān)，但是，鑒于該病癥的復(fù)雜性質(zhì)，此類遺傳因素的鑒定仍然是有疑問的。

已經(jīng)描述了用于診斷急性冠狀動脈綜合征、包括心力衰竭的方法，尤其是WO/2002/083913、WO2002/089657和WO2006/120152。所有這些方法使用例如血液或尿液中的腦鈉肽(brain?natriuretic?peptide，BNP)的水平作為急性冠狀動脈綜合征的標(biāo)志物。然而，該多肽是由心臟的心室響應(yīng)于心肌細(xì)胞的過度伸展而分泌的，因此其是反映心臟狀況的生理標(biāo)志物。需要更精確地反映受試者患心力衰竭的遺傳傾向性的遺傳標(biāo)志物。此類標(biāo)志物也允許更早地進(jìn)行診斷。

因此，預(yù)測患心力衰竭的遺傳標(biāo)志物的獲得是十分理想的。目前，不存在此類標(biāo)志物。

發(fā)明內(nèi)容

現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)：在心臟疾病中，血液中的miRNA譜被改變。不希望被任何理論所限，相信細(xì)胞、包括心肌細(xì)胞通過外來體將這些miRNA分泌進(jìn)入血液，在疾病中，分泌模式被改變。

因此，本發(fā)明人證明，血液中的miRNA譜可用作心力衰竭的新的診斷工具或生物標(biāo)志物方法。

本發(fā)明的目標(biāo)是提供用于治療、預(yù)防或測定心力衰竭(其風(fēng)險(xiǎn))的工具和方法。

因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防受試者中的心力衰竭的方法，該方法包括下列步驟：

-降低所述受試者中的至少一種miRNA的表達(dá)、數(shù)量和/或活性；或

-降低所述受試者中的至少一種miRNA與其mRNA靶標(biāo)之間的相互作用；或