[發(fā)明專利]可切換的親和力結合劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080018138.4
• 申請日: 2010-02-17
• 公開（公告）號: CN102405278A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發(fā)明（設計）人: A·蘇德;A·杜爾加-塔洛奇;E·W·科瓦茨;E·R·羅欣
• 申請（專利權）人: 通用電氣公司
• 主分類號: C12N5/00
• 分類號: C12N5/00;A61K47/48
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李進;林森

相關申請的交叉參考

本申請是2009年2月20日提交的標題為“可切換的親和力結合劑”的美國臨時專利申請?zhí)?1/153,990的部分繼續(xù)申請，其通過引用結合到本文中。

背景

本發(fā)明一般涉及在暴露于環(huán)境線索后親和力發(fā)生改變的親和力結合劑(如抗體、肽等)。

隨著生物學研究、技術和醫(yī)學的進步，對以溫和、不偏倚的形式探索和/或操作生物學方式的改進組合物和方法的需求逐漸增加。例如，新出現(xiàn)的細胞療法領域?qū)⒑芸煨枰宰屗鼈儽３治葱揎椇臀椿罨共l(fā)癥或無效治療的危險最小的方式積極地鑒定、純化和給予理想細胞的能力。輔助這種鑒定和純化的策略典型地依賴于特異性、高親和力抗體。例如，DETACHaBeads(Dynal/Invitrogen)是將B和T細胞捕獲至抗體涂覆磁珠上的市售獲得產(chǎn)品。然后為了輔助給藥，通過輸入與第一抗體競爭性結合并釋放細胞的第二抗體實現(xiàn)細胞釋放。另一種產(chǎn)品，Isolex磁性細胞選擇系統(tǒng)(Magnetic?Cell?Selection?System)(Baxter)依賴于類似路徑將CD34+干細胞捕獲至磁珠上。但是，在這種情況下細胞游離發(fā)生在加入與珠結合的次級抗體競爭性結合的釋放肽之后。盡管已證明這些系統(tǒng)的實用性，但是必需加入另外的試劑增加了時間、成本，并且加入的抗體或肽可能污染細胞產(chǎn)物。

類似地，在篩選用于疾病診斷和治療確定的生物學樣品，以及用于生物學或防御應用的傳感器時，靶鑒定受到使用經(jīng)典的高親和力結合劑比如抗體的限制，所述結合劑在不損傷樣品的情況下難以除去并減小或消除進一步分析的能力。因為這些局限性，所以仍有強勁的動力發(fā)展下一代平臺用于生物學鑒定和操作，它保持特異性、高親和力靶結合的功能優(yōu)越性，但能夠以允許生物學樣品完整和未修飾的方式根據(jù)指令釋放靶。

簡述

本發(fā)明涉及在暴露于特異性環(huán)境線索后親和力發(fā)生顯著改變的親和力結合劑(如抗體、肽等)。在一種環(huán)境狀態(tài)下，這些結合劑證明理想靶的高親和力、高選擇性結合，而在第二種狀態(tài)下它們對相同靶表現(xiàn)低親和力和最小的結合。這些可切換的親和力結合劑通過提供從靶的受控附著(attachment)和釋放同時保持高親和力、高選擇性結合劑-靶相互作用的優(yōu)點，比經(jīng)典親和力結合劑明顯改善。

用于結合和釋放細胞的本發(fā)明試劑盒的一個實施方案包含結合劑，所述結合劑包含可在結合細胞的高親和力狀態(tài)與釋放細胞的低親和力狀態(tài)之間切換的環(huán)境反應性分子開關；其中結合劑包含親和體(affibody)、抗體、肽、其片段，或其組合中的一種或多種。

用于結合和釋放靶的本發(fā)明試劑盒的一個實施方案包含結合劑，所述結合劑包含可在結合靶的高親和力狀態(tài)與釋放靶的低親和力狀態(tài)之間切換的環(huán)境反應性分子開關；其中結合劑包含2-螺旋結合劑。靶可包含細胞、病原體、病毒、抗體或抗體片段、蛋白質(zhì)、核酸、肽、脂質(zhì)、多糖，或其組合。

用于結合和釋放靶的本發(fā)明試劑盒的另一個實施方案包含結合劑，所述結合劑包含可在結合靶的高親和力狀態(tài)與釋放靶的低親和力狀態(tài)之間切換的環(huán)境反應性分子開關；其中結合劑包含化學上修飾的抗體或其片段。靶可選自細胞、病原體、病毒、抗體或抗體片段、蛋白質(zhì)、核酸、肽、脂質(zhì)、多糖，或其組合。

用于結合和釋放細胞的本發(fā)明方法的一個實例，包括以下步驟：使一種或多種結合劑接觸細胞，其中結合劑包含可在結合細胞的高親和力狀態(tài)與釋放細胞的低親和力狀態(tài)之間切換的環(huán)境反應性分子開關；為開關引入觸發(fā)器以引起細胞與結合劑結合或從結合劑釋放。觸發(fā)器可包含酸、堿、熱、光、磁場、電場、還原劑、鹽或其組合的一種或多種。結合劑可包含親和體、抗體、肽、其片段，或其組合中的一種或多種。

用于結合和釋放靶的本發(fā)明方法的一個實例，包括以下步驟：使一種或多種結合劑接觸靶，其中結合劑包含可在結合靶的高親和力狀態(tài)與釋放靶的低親和力狀態(tài)之間切換的環(huán)境反應性分子開關，其中結合劑包含2-螺旋結合劑；為開關啟動觸發(fā)器以引起靶與結合劑結合或從結合劑釋放。靶可選自細胞、病原體、病毒、抗體或抗體片段、蛋白質(zhì)、核酸、肽、脂質(zhì)、多糖，或其組合。觸發(fā)器可包含酸、堿、熱、光、磁場、電場、還原劑、鹽或其組合中的一種或多種。

用于結合和釋放靶的本發(fā)明方法的另一個實例，包括以下步驟：使一種或多種結合劑接觸靶，其中結合劑包含可在結合靶的高親和力狀態(tài)與釋放靶的低親和力狀態(tài)之間切換的環(huán)境反應性分子開關，其中結合劑包含化學上修飾的抗體或其片段；為開關啟動觸發(fā)器以引起靶與結合劑結合或從結合劑釋放。靶可選自細胞、病原體、病毒、抗體或抗體片段、蛋白質(zhì)和核酸。觸發(fā)器包含酸、堿、熱、光、還原劑、鹽或其組合中的一種或多種。