[發(fā)明專利]工程再造mRNA一級(jí)結(jié)構(gòu)以增強(qiáng)蛋白質(zhì)產(chǎn)生

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201080018081.8
• 申請(qǐng)日: 2010-02-24
• 公開（公告）號(hào): CN102428174A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: V·P·莫羅;S·A·查佩爾;周偉;G·M·伊德爾曼
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 斯克利普斯研究所
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12P21/00
• 代理公司: 北京派特恩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11270
• 代理人: 蔣雅潔;遲姍

1.一種提高全長(zhǎng)蛋白質(zhì)表達(dá)效率的方法，其包括：

a)提供多核苷酸，其包含：

i)所述蛋白質(zhì)的編碼序列；

ii)一級(jí)起始密碼子，其位于所述編碼序列上游；和

iii)一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子，其位于所述編碼序列內(nèi)；和

b)使一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子突變，其中所述突變導(dǎo)致在所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子處蛋白質(zhì)合成的起始發(fā)生減少，所述蛋白質(zhì)合成的起始發(fā)生減少導(dǎo)致偏離所述一級(jí)起始密碼子的核糖體轉(zhuǎn)移減少，

從而提高全長(zhǎng)蛋白質(zhì)表達(dá)效率。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子突變包括使一個(gè)或多個(gè)核苷酸突變，使得氨基酸序列保持不變。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子與所述編碼序列位于相同閱讀框內(nèi)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子與所述編碼序列不同框。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子位于核糖體募集位點(diǎn)上游或下游一個(gè)或多個(gè)核苷酸的位置。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述核糖體募集位點(diǎn)包括帽或IRES。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子選自AUG、ACG、GUG、UUG、CUG、AUA、AUC和AUU。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述編碼序列內(nèi)超過一個(gè)二級(jí)起始密碼子被突變。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述編碼序列內(nèi)所有二級(jí)起始密碼子被突變。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子突變包括使側(cè)翼核苷酸突變成較不利的核苷酸背景。

11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子突變并不引入新的起始密碼子。

12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子突變并不改變被突變密碼子的使用偏好。

13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其進(jìn)一步包括減少除該全長(zhǎng)被編碼蛋白質(zhì)以外的截短蛋白質(zhì)、多肽或肽的產(chǎn)生。

14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中使一個(gè)或多個(gè)二級(jí)起始密碼子突變并不引入miRNA種子序列、剪接供體位點(diǎn)、剪接受體位點(diǎn)或mRNA去穩(wěn)定元件。

15.一種提高全長(zhǎng)蛋白質(zhì)表達(dá)效率的方法，其包括：

a)提供多核苷酸序列，其包含所述蛋白質(zhì)的編碼序列，和位于所述編碼序列內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)；和

b)使所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)突變，其中所述突變導(dǎo)致在所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)處miRNA結(jié)合發(fā)生減少，所述miRNA結(jié)合發(fā)生減少導(dǎo)致由miRNA介導(dǎo)的蛋白質(zhì)翻譯的下調(diào)作用發(fā)生減少，從而提高全長(zhǎng)蛋白質(zhì)表達(dá)效率。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)突變包括使一個(gè)或多個(gè)核苷酸突變，使得氨基酸序列保持不變。

17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)突變包括使miRNA種子序列中的一個(gè)或多個(gè)核苷酸突變。

18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)突變包括使一個(gè)或多個(gè)核苷酸突變，使得起始密碼子不被引入所述多核苷酸序列中。

19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)突變包括使一個(gè)或多個(gè)核苷酸突變，使得稀有密碼子不被引入所述多核苷酸序列中。

20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中使所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)突變包括使一個(gè)或多個(gè)核苷酸突變，使得額外的miRNA種子序列不被引入所述多核苷酸序列中。

21.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述一個(gè)或多個(gè)miRNA結(jié)合位點(diǎn)位于所述編碼序列內(nèi)。