[發明專利]轉氨酶生物催化劑

有效

• 申請號: 201080017312.3
• 申請日: 2010-02-26
• 公開（公告）號: CN102405281A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 克里斯多佛·薩維爾;艾米麗·穆德弗;杰弗里·C·穆爾;保羅·N·迪瓦恩;雅各布·M·杰恩
• 申請（專利權）人: 科德克希思公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12P13/00
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 申基成;鄭霞

1.一種轉氨酶多肽，所述轉氨酶多肽在指定的反應條件下、在氨基供體異丙胺存在時，能夠轉化4-氧-4-[3-(三氟甲基)-5，6-二氫[1，2，4]三唑[4，3-a]吡嗪-7(8H)-基]-1-(2，4，5-三氟苯基)丁-2-酮(“酮酰胺底物”)為(2R)-4-氧-4-[3-(三氟甲基)-5，6-二氫[1，2，4]三唑[4，3-a]吡嗪-7(8H)-基]-1-(2，4，5-三氟苯基)丁-2-胺(“產物”)到HPLC-UV在210nm可檢測的產物水平，其中所述反應條件包括約2g/L酮酰胺底物、約0.5M異丙胺、約22℃、約pH7.5、約5％DMSO、約100μM吡哆醛磷酸和約20mg/mL轉氨酶多肽。

2.如權利要求1所述的轉氨酶多肽，其中所述轉氨酶多肽能夠在所述指定的反應條件下以等于或大于SEQ?ID?NO：4多肽活性的活性轉化所述酮酰胺底物為所述產物。

3.如權利要求1所述的轉氨酶多肽，其中所述轉氨酶能夠轉化所述酮酰胺底物為至少90％對映體過量的產物。

4.如權利要求1所述的轉氨酶多肽，其中所述轉氨酶能夠轉化所述酮酰胺底物為至少99％對映體過量的產物。

5.如權利要求1至4任一項所述的轉氨酶多肽，所述轉氨酶多肽包括與SEQ?ID?NO：4至少80％相同的氨基酸序列。

6.如權利要求5所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列在選自：X62、X69、X122、X136、X137、X195、X199、X208、X209、X223、X225、X282和X284的一個或多個殘基位置包括與SEQ?ID?NO：2相比的殘基差異。

7.如權利要求5所述的轉氨酶多肽，其中所述殘基差異發生在選自：X62、X136、X137、X195、X199、X208、X209、X223、X225和X282的一個或多個殘基位置，連同在選自X69、X122和X284的一個或多個殘基位置的殘基差異。

8.如權利要求6或7所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征的至少一種或多種：

對應X69的殘基是半胱氨酸(C)或非極性、極性、或脂肪族殘基；

對應X122的殘基是受限制的、非極性或脂肪族殘基；

對應X223的殘基是受限制的殘基；和

對應X284的殘基是非極性殘基。

9.如權利要求8所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括至少以下特征：(1)對應X69的殘基是C或非極性、極性或脂肪族殘基，和/或對應X284的殘基是非極性殘基；(2)對應X122的殘基是受限制的、非極性或脂肪族殘基；且(3)對應X223的殘基是受限制的殘基。

10.如權利要求9所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征：X69是C或非極性、極性或脂肪族殘基；X122是受限制的、非極性或脂肪族殘基；且X223是受限制的殘基。

11.如權利要求10所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征：X69是G、C、T、A或S；X122是M、I、V或H；且X223是P。

12.如權利要求9所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征：X122是受限制的、非極性或脂肪族殘基；X223是受限制的殘基；且X284是非極性殘基。

13.如權利要求12所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征：X122是M、I、V或H；X223是P；且X284是G。

14.如權利要求8所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征：X69是C或非極性、極性或脂肪族殘基；X122是受限制的、非極性或脂肪族殘基；X223是受限制的殘基；且X284是非極性殘基。

15.如權利要求14所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征：X69是G、C、T、A或S；X122是M、I、V或H；X223是P；且X284是G。

16.如權利要求9所述的轉氨酶多肽，其中所述氨基酸序列包括以下特征：

X69是C或T；X122是M或I；X223是P；且X284是G。