[發明專利]具有產生甲基萘醌的優異能力的菌株

有效

• 申請號: 201080017300.0
• 申請日: 2010-04-15
• 公開（公告）號: CN102753678B
• 公開（公告）日: 2016-10-26
• 發明（設計）人: 帕斯卡爾·富爾卡謝;帕特里克·布瓦亞瓦爾;菲利普·霍瓦特
• 申請（專利權）人: 杜邦營養生物科學有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P7/66;A23L33/135;A23L33/15;A61K35/744;A61K35/741;A61K31/122;A61P19/10;A61P9/00;A61P17/00;A23K10/18;A23K20/174;C12R1/01
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;謝燕軍

技術領域

本發明涉及具有產生甲基萘醌的優異能力的菌株。

背景技術

甲基萘醌(menaquinone)或維生素K2參與蛋白中某些谷氨酸殘基的羧化以形成γ-羧基谷氨酸殘基(縮寫為Gla-殘基)。改性殘基通常(但不總是)位于稱為Gla域的特定蛋白域中。Gla-殘基通常參與鈣的結合。Gla-殘基對所有已知的Gla-蛋白的生物活性而言均是必不可少的(Furie?B，Bouchard?BA，Furie?BC；Blood?93(6)：1798-808)。迄今為止，已經發現14個具有Gla域的人蛋白，它們在三種生理過程的調控中起著關鍵作用，例如血液凝固(凝血酶原(凝血因子II)、凝血因子VII、IX、X、蛋白C、蛋白S和蛋白Z)；骨代謝(骨鈣蛋白，也稱為骨Gla-蛋白(BGP)和基質Gla蛋白(MGP)；以及血管生物學。

因此，甲基萘醌缺乏癥可以誘導若干病理，例如出血、凝固機能障礙、骨質疏松癥.....。通常，被認為特別易患甲基萘醌缺乏癥的患者群體是新生兒、老年人、患有肝、膽或腸機能障礙的患者和長期用抗生素治療的患者。

現有技術建議了補充這些患者的甲基萘醌缺乏的若干方法。這些方法中的一種是向這些患者施用產生甲基萘醌的細菌。事實上，甲基萘醌由腸內菌叢產生，尤其由大腸桿菌(Escherichia?coli)、枯草桿菌(Bacillus?subtilis)和類桿菌(Bacteroides)亞種類的細菌產生。甲基萘醌也由若干乳酸菌產生，例如雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、乳酸球菌屬(Lactococcus)、明串珠菌屬(Leuconostoc)、腸球菌屬(Enteroccocus)和丙酸桿菌屬(Propionibacterium)。特別是，最近已經在WO?2008/040793中公開能夠比相應的野生型菌株產生更多甲基萘醌的乳酸乳球菌乳脂亞種(Lactococcus?lactis?subsp.cremoris)的特定變種。

然而，擁有能夠產生更多量甲基萘醌的菌株是非常令人感興趣的。

發明簡述

本發明涉及具有產生甲基萘醌的優異能力的菌株。事實上，本發明人在他們的研究期間發現本發明的特定菌株具有比迄今為止已知的其他菌株更優異的產生甲基萘醌的能力。這些菌株已經根據布達佩斯條約以以下保藏號保藏：CNCM?I-4128、DSM?23476、DSM?23477、DSM?23478、DSM?23479。本發明尤其涉及這些菌株及其變種在產生甲基萘醌中的用途。

發明詳述

本發明涉及具有比迄今為止已知的其他菌株更優異的產生甲基萘醌的能力的菌株。

本發明的一個目的涉及由Danisco?France?SAS(20，rue?de?Brunel，75017?Paris，France)根根據布達佩斯條約于2009年2月24日保藏在法國培養物和微生物國家保藏中心(Collection?Nationale?de?Cultures?de?Microorganismes)(CNCM，Institut?Pasteur，25，rue?du?Docteur?Roux，75724?Paris?cedex?15，France)的保藏號為CNCM?I-4128的乳酸乳球菌乳脂亞種(Lactococcus?lactis?subsp.cremoris)的菌株或其變種。菌株CNCM?I-4128或其變種產生大量甲基萘醌。特別地，本發明人顯示，當用試驗A測定時，每100g用所述菌株發酵的乳液中，菌株CNCM?I-4128產生至少7μg的甲基萘醌。

通常，當用本發明試驗A測定時，每100g用所述變種發酵的乳液中，菌株CNCM?I-4128的變種產生至少7μg，特別地至少8μg，更特別至少9μg，更特別至少10μg，更特別至少11μg，最特別至少12μg的甲基萘醌。

試驗A在實驗部分完整描述。簡言之，試驗A包括以下步驟：

-用5.10⁴到10⁷cfu/mL的待測試菌株接種含有100mL脫脂UHT乳液的兩個燒瓶，

-在不攪拌下在23℃到30℃范圍中選定的恒溫水浴中培養接種的燒瓶，

-用Cinac?System(Ysebaert?System)的pH探針測定并記錄兩個燒瓶之一的pH變化，

-當pH到達4.60+/-0.1時，將沒有測定pH的燒瓶溫度冷卻到6℃以停止培養，

-將所述燒瓶在6℃下貯存14h到20h，

-手工均化乳液，