[發(fā)明專利]酶突變體無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201080014556.6 | 申請(qǐng)日： | 2010-01-29 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102482330A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-05-30 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | R·莫伊希;邁克爾·納格斯;L·賈雅辛格;J·懷特;B·麥克基翁;J·米爾頓 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 牛津納米孔技術(shù)有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C07K14/31 | 分類號(hào)： | C07K14/31;C12N9/12 |
| 代理公司： | 北京北翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285 | 代理人： | 張廣育;姜建成 |
| 地址： | 英國(guó)*** | 國(guó)省代碼： | 英國(guó);GB |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 突變體 | ||
1.一種包含核酸結(jié)合蛋白和表面的構(gòu)建體，其中從所述結(jié)合蛋白質(zhì)上除去至少一個(gè)天然可及的半胱氨酸殘基，其中所述結(jié)合蛋白通過(guò)一個(gè)或多個(gè)可及半胱氨酸殘基連接在所述表面上，并且其中所述結(jié)合蛋白保持其結(jié)合核酸的能力。
2.權(quán)利要求1的構(gòu)建體，其中從所述結(jié)合蛋白上除去所有天然可及的半胱氨酸，并且將一個(gè)或多個(gè)非天然可及半胱氨酸殘基引入所述結(jié)合蛋白。
3.權(quán)利要求2的構(gòu)建體，其中通過(guò)置換引入所述非天然可及半胱氨酸殘基。
4.權(quán)利要求1的構(gòu)建體，其中所述結(jié)合蛋白保留一個(gè)或多個(gè)可及半的胱氨酸殘基，除去其他可及的半胱氨酸殘基。
5.權(quán)利要求2至4中任一項(xiàng)的構(gòu)建體，其中通過(guò)置換除去所述天然半胱氨酸殘基。
6.權(quán)利要求5的構(gòu)建體，其中所述天然半胱氨酸殘基被蘇氨酸置換。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的構(gòu)建體，其中所述可及的半胱氨酸能夠與巰基特定基團(tuán)反應(yīng)。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的構(gòu)建體，其中所述核酸結(jié)合蛋白是核酸處理酶并且保持其處理核酸的能力。
9.權(quán)利要求8的構(gòu)建體，其中所述核酸處理酶衍生自核酸酶。
10.權(quán)利要求9的構(gòu)建體，其中所述核酸酶是以下酶分類(EC)組中任一組的成員：3.1.11、3.1.13、3.1.14、3.1.15、3.1.16、3.1.21、3.1.22、3.1.25、3.1.26、3.1.27、3.1.30和3.1.31。
11.權(quán)利要求10的構(gòu)建體，其中所述核酸處理酶衍生自核酸外切酶。
12.權(quán)利要求11的構(gòu)建體，其中所述核酸外切酶包含SEQ?ID?NO：6、52、54和56中任一個(gè)所顯示的序列或者其變體。
13.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的構(gòu)建體，其中所述核酸結(jié)合蛋白包含SEQ?ID?NO：8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48和50中任一個(gè)所顯示的序列或其變體。
14.權(quán)利要求8的構(gòu)建體，其中所述核酸處理酶衍生自聚合酶、解旋酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶。
15.權(quán)利要求14的構(gòu)建體，其中
(a)所述聚合酶是酶分類(EC)組2.7.7.6、2.7.7.7、2.7.7.19、2.7.7.48和2.7.7.49中任一組的成員；
(b)所述解旋酶是酶分類(EC)組3.6.1.-和2.7.7.-中任一組的成員；或者
(c)所述拓?fù)洚悩?gòu)酶是酶分類(EC)組5.99.1.2和5.99.1.3中任一組的成員。
16.權(quán)利要求15的構(gòu)建體，其中所述聚合酶是DNA依賴的DNA聚合酶、RNA依賴的DNA聚合酶、DNA依賴的RNA聚合酶或RNA依賴的RNA聚合酶。
17.權(quán)利要求15的構(gòu)建體，其中所述解旋酶是ATP依賴的DNA解旋酶、ATP依賴的RNA解旋酶或不依賴ATP的RNA解旋酶。
18.權(quán)利要求15的構(gòu)建體，其中所述拓?fù)洚悩?gòu)酶是促旋酶。
19.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的構(gòu)建體，其中所述表面是跨膜蛋白質(zhì)孔或其亞基。
20.權(quán)利要求19的構(gòu)建體，其中所述跨膜蛋白質(zhì)孔是α-溶血素(α-HL)。
21.權(quán)利要求20的構(gòu)建體，其中所述表面包含SEQ?ID?NO：2所示的序列或其變體。
22.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的構(gòu)建體，其中所述酶通過(guò)一個(gè)或多個(gè)連接體連接于所述表面。
23.權(quán)利要求22的構(gòu)建體，其中所述一個(gè)或多個(gè)連接體是核酸雜交連接體。
24.一種用于測(cè)序核酸的修飾孔，包含至少一個(gè)權(quán)利要求19至21中任一項(xiàng)的構(gòu)建體。
25.權(quán)利要求24的孔，其中所述孔包含權(quán)利要求21的構(gòu)建體和6個(gè)亞基，所述亞基包含SEQ?ID?NO：2所示的序列或其變體。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于牛津納米孔技術(shù)有限公司，未經(jīng)牛津納米孔技術(shù)有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購(gòu)買(mǎi)此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請(qǐng)聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201080014556.6/1.html，轉(zhuǎn)載請(qǐng)聲明來(lái)源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 人生長(zhǎng)激素糖基化突變體的制備方法和組合物
- 具有改進(jìn)的轉(zhuǎn)化效率的細(xì)菌突變體
- 全基因組范圍的植物基因功能鑒定的方法
- 一種萊茵衣藻重金屬鎘吸附突變體的篩選方法
- 熱穩(wěn)定膽固醇酯酶突變體OPE-A<base:Sup>355
- 熱穩(wěn)定膽固醇酯酶突變體OPE-S<base:Sup>109
- 針對(duì)流感的免疫原性組合物
- 一種香蕉枯萎菌4號(hào)生理小種DCL基因缺失突變體及其小RNA
- 糖基轉(zhuǎn)移酶突變體以及在合成β-D-葡萄糖甙中的應(yīng)用
- 熱穩(wěn)定性提高的DNA聚合酶突變體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用
