[發明專利]產生L-氨基酸的微生物和利用其生產L-氨基酸的方法

無效

• 申請號: 201080014195.5
• 申請日: 2010-02-16
• 公開（公告）號: CN102365362A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: 朱哉映;李光鎬;裴賢愛
• 申請（專利權）人: CJ第一制糖株式會社
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N1/21;C12P13/04
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 趙蓉民;陸惠中

發明背景?

1.發明領域

本發明涉及具有蔗糖可同化性(sucrose?assimilability)和L-氨基酸產生能力的屬于埃希氏菌屬某種(Escherichia?sp.)的微生物，其通過將編碼從蔗糖同化微生物得到的蔗糖代謝酶的基因引入具有L-氨基酸產生能力的屬于埃希氏菌屬某種的非蔗糖同化微生物中而獲得，以及利用所述微生物產生L-氨基酸的方法。?

2.相關領域的說明?

由于對生物燃料生產日益增長的需求以及由不正常的氣候引起的農業欠收，在工業發酵中作為主要碳源使用的淀粉糖的價格增長快速。可選地，蔗糖或含有高濃度蔗糖的糖蜜——比淀粉糖便宜——作為碳源在工業發酵中的使用對于保證成本競爭是有利的。?

大約50％的野生型天然形成的大腸桿菌(E.coli)能夠代謝蔗糖，但是通常用于工業發酵的大腸桿菌K12菌株、B菌株和C菌株沒有同化蔗糖的能力(Mol.Microbiol.(1998)2：1-8，Can.J.Microbiol.(1999)45：418-422)。因此，發酵工業的最重要的挑戰之一是鑒別涉及蔗糖同化作用的基因，通過改進而建立提高的蔗糖同化作用相關基因以及將該基因應用到非蔗糖同化的工業大腸桿菌菌株中，以產生期望的代謝物。?

為了賦予工業大腸桿菌菌株蔗糖可同化性，引入涉及蔗糖同化作用的基因或基因簇——得自具有蔗糖可同化性的微生物——的方法已被普遍使用。例如，通過用存在于屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)的沙門氏菌屬(Salmonella)某種(J.Bacteriol.(1982)151：68-76，Mol.Microbiol.(1998)2：1-8，J.Bacteriol.(1991)173：7464-7470，美國專利號7179623)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella?pneumoniae)(J.Gen.Microbiol.(1988)134：1635-1644)和解淀粉歐文氏菌(Erwinia?amylovora)(J.Bacteriol.(2000)182：5351-5358)中的scr調節子轉化而賦予大腸桿菌K12蔗糖可同化性的方法在本領域中是悉知的。得自具有蔗糖可同化性的非K12大腸桿菌或致病大腸桿菌的csc調節子(Appl.Environ.Microbiol.(1992)58：2081-2088，美國專利號6960455)的引入、存在于分離自大腸桿菌AB1281的接合質粒scr53中的涉及蔗糖同化作用的基因簇(美國專利號4806480)的引入，以及得自革蘭氏陽性微生物、變異鏈球菌(Streptococcus?mutans)(J.Bacteriol.(1989)171：263-271)和枯草桿菌?(Bacillus?subtilis)(J.Bacteriol.(1989)171：1519-1523)的scr調節子和sac操縱子的引入也是已知的。美國專利號7179623公開了利用大腸桿菌K12產生賴氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的方法，所述大腸桿菌K12通過向其中引入來自大腸桿菌VKPMB-7915的scr調節子而被制備。?

然而，仍然需要具有有效的蔗糖利用系統的工業微生物和利用其進行發酵的方法。因此，本發明人發現，可以利用屬于埃希氏菌屬某種的微生物的產生L-氨基酸的微生物從蔗糖中以高產量生產L-氨基酸，所述微生物通過引入得自蔗糖同化的變異鏈球菌的涉及蔗糖同化作用的基因簇而被制備，從而完成本發明。?

發明概述?

本發明的一個目的是提供具有蔗糖可同化性和L-氨基酸產生能力的屬于埃希氏菌屬某種的微生物，所述微生物通過賦予具有L-氨基酸產生能力的屬于埃希氏菌屬某種的非蔗糖同化微生物蔗糖可同化性而被制備。?

本發明的另一個目的是提供這樣一種方法：利用具有蔗糖可同化性和L-氨基酸產生能力的屬于埃希氏菌屬某種的微生物，從蔗糖中生產L-氨基酸。?

附圖簡介

圖1顯示根據本發明的一個具體實施方式的含有從變異鏈球菌得到的scrKABR的重組質粒pAscrSM的構建。?

發明詳述?

為了實現以上目標，本發明提供具有蔗糖可同化性和L-氨基酸產生能力的屬于埃希氏菌屬某種的微生物，其通過將編碼從蔗糖同化微生物得到的蔗糖代謝酶的基因引入到具有L-氨基酸產生能力的屬于埃希氏菌屬某種的非蔗糖同化微生物中而被得到。?