[發明專利]生物學取樣裝置

無效

• 申請號: 201080014151.2
• 申請日: 2010-01-25
• 公開（公告）號: CN102365055A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: E·沃姆;C·M·劉易斯;R·奧爾曼;D·曼特扎里斯
• 申請（專利權）人: 遺傳技術有限公司
• 主分類號: A61B10/00
• 分類號: A61B10/00
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 林曉紅

發明領域

本發明涉及用于獲得生物學材料的裝置和方法，尤其是涉及用于從懷 孕雌性的胎細胞獲得樣品的裝置和方法。

發明背景

早期產前診斷以檢測胎兒遺傳紊亂對于孕婦和醫生二者做出明智的決 定都是需要的。侵入性產前檢測的確定性方法(羊膜腔穿刺術和絨毛膜絨毛 取樣)具有雖小卻無法忽略的流產風險，并且由于細胞培養和分析所需要的 時間，其結果在孕13周前很少是可用的。

使用母體血清分析物篩選和超聲波的“非侵入性”篩選能夠鑒定有胎 兒非整倍性風險的個體(主要是21三體性)，但陽性的篩選結果仍需要后續 侵入性步驟以得到明確的診斷。在約25-30個這樣的過程中，只有一個會正 確地顯示出胎兒非整倍性。

十多年來，世界上的許多實驗室都嘗試開發非侵入性(即僅微靜脈穿刺) 的方法來分離和分析胎細胞。顯著的優勢在于，能夠通過對回收的胎細胞 使用諸如熒光原位雜交(FISH)和熒光定量聚合酶鏈反應(QF-PCR)而得到明 確的結果。

母體血液中存在的胎細胞給非侵入性產前診斷提供了細胞的可能來 源。然而，胎細胞以極低的數量存在，并且其分離不是一項輕松的工作， 每10ml母體血液中僅有1或2個胎細胞存在。證據表明，母體循環中存在 完整的胎細胞不是普遍情況。

外周血液取樣的有吸引力的替代是從經子宮頸的樣品中分離和分析滋 養層。與母體血液中存在的多種循環胎細胞類型不同，經子宮頸的樣品中 的胎細胞都是胎盤來源的，壓倒多數的是滋養層(Bischoff?and?Simpson， 2006)。

長久以來推測子宮頸管含有胎兒來源的滋養層。早期胚胎被絨毛膜覆 蓋，但妊娠后期絨毛膜表面是光滑的。然而，直至1971年，宮頸內膜存在 胎細胞才通過鑒定用棉棒收集的中頸黏液樣品中的Y-染色體生成細胞而得 到證實(Shettles?et?al.，1971)。后繼報導推測這些胎細胞從退化的絨毛膜絨毛 脫落至下子宮極(Warren?et?al.，1972，Rhine?et?al.，1975)。在這種情況下，最 有可能在基脫膜與壁脫膜融合前，于妊娠7至13周發生。脫落的滋養層被 認為先在內開口部分層面的頸黏液后積累(Bulmer?et?al.，1995，Adinolphi?and? Sherlock，1997)，隨后安置于頸黏液中。

這些生物學情況因而定義了子宮頸內樣品用于產前診斷的機會，雖然 一些研究已經顯示早在妊娠5周就出現的滋養層復原(Katz-Jaffe?et?al.，2005， Mantzaris?et?al.，2005)。

提取滋養層的努力首次始于70年代。Rhine等人(1975和1977)描述了 “產前細胞提取儀”，用消毒的鹽水沖洗內子宮頸管來得到胎細胞。經培養， 近50％的情況下從所得的細胞中探測到了胎中期細胞。然而，其他研究者 報導了陰性的結果(Goldberg?et?al.，1980)，導致關于臨床應用的全面懷疑。 事后看來，不能探測到胎細胞或許也反應了用于獲得子宮頸內標本的臨床 技術缺陷以及用以證實胎細胞存在的方法的極低靈敏度。

在90年代引入絨毛膜絨毛取樣(CVS)后，對此的興趣又恢復。一系列 的技術使得在40-90％的被檢標本中檢測到了胎細胞(Adinolfi?et?al.，1995a， Bussani?et?al.，2002，Cioni?et?al.，2003，Fejgin?et?al.，2001，Massari?et?al.，1996； Miller?et?al.，1999；Rodeck?et?al.，1995；Tuttschek?et?al.，1995)。然而，因為分 析困難，多數中心的興趣再次減少。推測黏液中內含的胎細胞不能便捷地 用于FISH。近來，用于滋養層來源的顯微操縱細胞團的分子PCR技術顯示 可用于經子宮頸樣品(Bussani?et?al.，2004；Bussani?et?al.，2007；Katz-Jaffe?et? al.，2005)。

多數經子宮頸的標本含有多種來自母體的細胞(白細胞、巨噬細胞、扁 平上皮細胞、柱狀上皮細胞和內宮頸細胞)以及不同的來自胎兒的細胞(細胞 滋養層和含胞體滋養層)(Bulmer?et?al.，1995，Miller?et?al.，1999)。每種胎細胞 類型的出現率是可變的，并且似乎取決于收集方法和妊娠時期。