[發明專利]酮化合物的立體選擇性的酶促還原的方法

有效

• 申請號: 201080010291.2
• 申請日: 2010-03-03
• 公開（公告）號: CN102341501A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發明（設計）人: A.古普塔;M.博布科瓦;A.辰切爾
• 申請（專利權）人: IEP有限責任公司
• 主分類號: C12P7/02
• 分類號: C12P7/02;C12P7/24;C12P41/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 石克虎;林森

1.酮化合物至對應的手性羥基化合物的立體選擇性的、尤其是對映選擇性的酶促還原方法，其中用對映選擇性的、NADH-特異性的氧化還原酶還原酮化合物，其特征在于，為了還原該酮化合物，使用這樣的多肽，其在位置204-208處表現出R-ADH-標簽H-[P;?A]-[I;?A;?Q;?V;?L]-[G;?K]-R，且它們整體表現出下述其它結構特征：

(i)?N-端Rossmann卷曲GxxxGxG，

(ii)?在位置87處的NAG-基序，

(iii)?由S?139、Y?152和K?156組成的催化三聯體，

(iv)?在位置37處的帶負電荷的氨基酸基團，

(v)?在二聚化結構域中的2個C-端基序：[A;?S]-S-F和[V;?I]-DG-[G;?A]-Y-[T;?C;?L]-[A;?T;?S]-[Q;?V;?R;?L;?P]，

(vi)?在位置159?(在K?156下游4個位置)處的Val或Leu，

(vii)?在位置178處的Asn，和

(viii)?在位置188處的脯氨酸基團。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，使用這樣的多肽來還原酮化合物，

(a)?該多肽包含氨基酸序列SEQ?ID?NO:1至SEQ?ID?NO:7之一，或

(b)?其中，至少70%的氨基酸與氨基酸序列SEQ?ID?NO:1至SEQ?ID?NO:7之一的氨基酸相同，或

(c)?該多肽由選自SEQ?ID?NO:8至SEQ?ID?NO:14的核酸序列編碼，或

(d)?編碼該多肽的核酸序列在嚴格條件下與在(c)中提及的核酸序列之一雜交。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用通式I的酮化合物，

其中R₁、R₂和R₃彼此獨立地選自：

1)?-H，條件是，R₁不是H，

2)?-(C₁-C₂₀)-烷基，其中烷基是直鏈或支鏈的，

3)?-(C₂-C₂₀)-烯基，其中烯基是直鏈或支鏈的，且任選地含有至多4個雙鍵，

4)?-(C₂-C₂₀)-炔基，其中炔基是直鏈或支鏈的，且任選地含有至多4個叁鍵，

5)?-(C₆-C₂₄)-芳基，

6)?-(C₁-C₈)-烷基-(C₆-C₁₄)-芳基，

7)?-(C₅-C₁₄)-雜環，

8)?-(C₃-C₇)-環烷基，

其中上面在2)-8)下提及的基團是未取代的，或被下述取代基彼此獨立地取代1、2或3次：-OH、鹵素、-NO₂、-NH₂、-NHP和/或-M，其中P代表-(C₁-C₇)-烷基、-(C₂-C₇)-烯基、-(C₂-C₇)-炔基、-(C₆-C₁₄)-芳基或選自芐氧基羰基、三苯基甲基和叔丁基羰基的保護基，且M代表-(C₁-C₇)-烷基、-(C₂-C₇)-烯基、-(C₂-C₇)-炔基、-(C₆-C₁₄)-芳基或-(C₁-C₈)-烷基-(C₆-C₁₄)-芳基，其中在-(C₁-C₈)-烷基-(C₆-C₁₄)-芳基中的-(C₆-C₁₄)-芳基是未取代的，或被鹵素取代1、2或3次，和

9)??-CH₂-X-R，其中X代表O或S，且R選自-(C₁-C₇)-烷基、苯基和芐基，其中苯基和芐基被下述取代基取代1、2或3次：-(C₁-C₇)-烷基、-S(C₁-C₃)-烷基、-O(C₁-C₃)-烷基、-NO₂、-SCF₃、鹵素、-C(O)(C₁-C₃)-烷基和/或-CN，

或者，R₁與R₂一起，R₁與R₃一起，或R₂與R₃一起，形成包含3-6個C-原子的環，所述環是未取代的，或被下述取代基彼此獨立地取代1、2或3次：-OH、鹵素、-NO₂、-NH₂、-NHP和/或-M，且剩余基團選自上面在1)-9)下提及的基團。