[發明專利]艱難梭菌毒素的抗體

有效

• 申請號: 201080008673.1
• 申請日: 2010-02-19
• 公開（公告）號: CN102365097A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: 克利福德·肖恩;約翰·蘭登
• 申請（專利權）人: 衛生防護機構;麥克羅弗姆有限公司
• 主分類號: A61K39/40
• 分類號: A61K39/40;C07K16/12
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 陶貽豐;鄭霞

本發明涉及羊抗體及其在預防或治療艱難梭菌(Clostridium?difficile)感 染(CDI)中的用途。

艱難梭菌感染(CDI)目前是世界范圍內醫院的主要問題。該細菌引起醫 院的抗生素相關疾病，這種疾病自身表現為從輕度自身限制性腹瀉至可能 威脅生命的嚴重結腸炎的幾種形式。中老年患者大部分具有這些可能威脅 生命的疾病的風險并且CDI的發病率在過去10年內急劇增加。在2007年， 英國有50,000多例CDI，其中8,000多例伴隨著死亡。CDI每年度花費英 國國民衛生服務(NHS)超過5億英鎊。

各種艱難梭菌菌株可以通過大量方法來分類。最常用的方法之一是聚 合酶鏈式反應(PCR)核糖核酸分型(ribotyping)，其中使用PCR來擴增艱 難梭菌的16S-23S?rRNA基因間間隔區。來自這種方法的反應產物提供了 鑒定分離株細菌核糖核酸型的特征帶型。毒素分型(toxinotyping)是另一 分型方法，其中使用源自編碼艱難梭菌毒素的DNA的限制模式來鑒定菌 株的毒素型。在不同菌株的毒素基因之間觀察到的限制模式的差異還表示 艱難梭菌毒素家族內的序列變異。毒素B顯示了一些區域內的序列變異。 例如，毒素型0毒素B的C末端60kDa區域與毒素型III的相同區域相比 具有大約13％的序列差異。盡管這種序列差異相對較小，但它們對于分子 的抗原特性可能極為重要并且可能對抗體結合具有深遠影響并因此對抗 體的毒素中和特性具有深遠影響。

艱難梭菌菌株產生多種毒力因子，其中值得注意的是幾種蛋白毒素： 毒素A、毒素B以及在某些菌株中的二元毒素，該二元毒素與產氣莢膜梭 菌(Clostridium?perfringens)ι毒素類似。毒素A是大的蛋白細胞毒素/腸 毒素，它在感染的病理中起作用并且可能影響腸定殖過程。已經報道了毒 素A陰性/毒素B陽性菌株的CDI發作，這表明毒素B也能夠在疾病病理 中起重要作用。毒素A和毒素B二者都是經由包括下列的多步機制來實現 它們的作用機制的：結合細胞表面的受體，內化，隨后易位并釋放效應結 構域進入細胞胞質溶膠以及最終的胞內作用。對于毒素A和毒素B二者， 這牽涉了Rho家族的小GTP酶的滅活。對于這種滅活，每種毒素催化葡 萄糖部分(來自UDP-葡萄糖)轉移至Rho蛋白的氨基殘基。毒素A和毒 素B二者還都含有半胱氨酸蛋白酶形式的第二種酶活性，該第二種酶活性 似乎在易位后效應結構域釋放到胞質溶膠中起重要作用。艱難梭菌二元毒 素通過牽涉將ADP-核糖部分由NAD轉移至其靶蛋白的機制修飾細胞肌動 蛋白而以不同的方式起作用。

艱難梭菌感染的治療目前依賴于抗生素，其中甲硝唑和萬古霉素構成 了選擇的治療。然而，這些抗生素不是在所有情況下都有效，并且20-30％ 的患者會遭受疾病復發。最受關注的是在英國出現了毒力更強的菌株，該 菌株在2002年首次在加拿大被鑒定。這些菌株屬于PCR核糖核酸型027， 毒素型III，它們會引起具有比之前觀察到的CDI高3倍的直接歸因死亡率 的CDI。

因此現在尤其急迫地需要新的治療，因為目前的抗生素功效似乎在降 低。

因此，本領域內存在對能夠特別地解決艱難梭菌感染(CDI)的新療 法/治療的需要。這種需要被本發明解決了，本發明解決了上述問題的一個 或多個。

更詳細地，本發明的第一方面提供了用于預防或治療CDI的羊抗體。 在另一方面，本發明提供了包含用于預防或治療CDI的羊抗體的抗體組合 物。在一個實施方案中，所述羊抗體是多克隆抗體。

使用時，本發明的抗體結合艱難梭菌毒素或其片段，優選中和毒素或 其片段的生物活性。因此，本發明的抗體能夠預防或治療CDI并優選還預 防患者復發。

本發明的抗體提供了相對于其他治療的明顯優勢，因為它們能夠抑制 艱難梭菌一種或多種毒素的生物活性，同時對患者具有低的免疫原性作 用。此外，本發明的抗體可以高效價地產生。因此，羊抗體可以容易地獲 得并且可以保護和/或患者免于艱難梭菌產生的病理作用而具有最小的副 作用。本發明的抗體還可以用于開發針對CDI的被動免疫的疫苗。

本發明的首要目標是艱難梭菌毒素或其片段。本發明的抗體可以結合 和/或中和的合適的艱難梭菌毒素包括引起CDI或其癥狀或與CDI或其癥 狀相關的任何艱難梭菌毒素。在又一實施方案中，本發明的抗體結合和/ 或中和選自下列的至少一種類型的艱難梭菌毒素：艱難梭菌毒素A或其片 段、艱難梭菌毒素B或其片段、以及艱難梭菌二元毒素或其片段。