[發(fā)明專利]模塊式DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域及使用方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201080008139.0
• 申請日: 2010-01-12
• 公開（公告）號: CN102325791A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 烏拉·博納斯;延斯·博赫;塞巴斯蒂安·朔爾納克;托馬斯·拉艾
• 申請（專利權(quán)）人: 烏拉·博納斯;延斯·博赫;塞巴斯蒂安·朔爾納克;托馬斯·拉艾
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/82;G01N33/50
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.一種制備選擇性識別靶DNA序列中至少一個(gè)堿基對的多肽的方法，所述方法包括合成包含重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域的多肽，其中所述重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域包含至少一個(gè)衍生自轉(zhuǎn)錄激活子樣(TAL)效應(yīng)子的重復(fù)序列單元，其中所述重復(fù)序列單元包含決定所述靶DNA序列中堿基對的識別的高變區(qū)，其中所述重復(fù)序列單元負(fù)責(zé)所述DNA序列中一個(gè)堿基對的識別，并且其中所述高變區(qū)包含選自由以下組成的組的成員：

(a)用于識別C/G的HD；

(b)用于識別A/T的NI；

(c)用于識別T/A的NG；

(d)用于識別C/G或A/T或T/A或G/C的NS；

(e)用于識別G/C或A/T的NN；

(f)用于識別T/A的IG；

(g)用于識別C/G的N；

(h)用于識別C/G或T/A的HG；

(i)用于識別T/A的H；和

(j)用于識別G/C的NK。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述高變區(qū)對應(yīng)于所述重復(fù)序列單元中的氨基酸12和13。

3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域包含1.5至40.5個(gè)重復(fù)序列單元。

4.權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域包含11.5至33.5個(gè)重復(fù)序列單元。

5.權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其中所述多肽還包含至少一個(gè)可操作連接至所述重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域的附加結(jié)構(gòu)域。

6.權(quán)利要求5所述的方法，其中所述附加結(jié)構(gòu)域包括細(xì)菌、病毒、真菌、卵菌、人、動物、植物或人工蛋白或其部分。

7.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述附加結(jié)構(gòu)域包括能夠修飾DNA或RNA的蛋白或其功能性部分或結(jié)構(gòu)域。

8.權(quán)利要求6所述的方法，其中所述附加結(jié)構(gòu)域包括選自由以下組成的組的蛋白或其功能性部分或結(jié)構(gòu)域：轉(zhuǎn)錄激活子、轉(zhuǎn)錄阻遏物、抗性介導(dǎo)蛋白、核酸酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶、連接酶、整合酶、重組酶、解離酶、甲基化酶、乙酰基轉(zhuǎn)移酶、去甲基化酶和脫乙酰酶。

9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的方法，其中所述多肽的重復(fù)序列結(jié)構(gòu)域通過表達(dá)編碼所述多肽的DNA序列而被合成，并且其中所述編碼所述多肽的DNA序列通過在一個(gè)或多個(gè)靶載體中預(yù)裝配所述重復(fù)序列單元而被裝配，所述靶載體可以隨后被裝配成包含所述編碼所述多肽的DNA序列的最終載體。

10.權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的方法，其中所述重復(fù)序列單元包含30至40個(gè)氨基酸。

11.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述重復(fù)序列單元包含33、34、35或39個(gè)氨基酸。

12.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)所述的方法，其中所述多肽識別所述靶DNA序列中至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個(gè)堿基對。

13.權(quán)利要求12所述的方法，其中所述多肽識別所述靶DNA序列中所有堿基對。

14.權(quán)利要求12所述的方法，其中所述多肽能夠結(jié)合至所述靶DNA序列。

15.一種多肽，所述多肽由權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的方法制備。

16.權(quán)利要求15所述的多肽，其中所述多肽不是天然存在的。

17.一種DNA，包含權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)所述的方法制備的多肽的編碼序列。

18.權(quán)利要求17所述的DNA，其中所述DNA不是天然存在的。

19.一種表達(dá)盒，包含與權(quán)利要求17所述DNA可操作連接的啟動子。

20.一種非人宿主細(xì)胞，包含權(quán)利要求19所述的表達(dá)盒。

21.權(quán)利要求20所述的宿主細(xì)胞，其中所述宿主細(xì)胞是細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞、動物細(xì)胞或植物細(xì)胞。

22.一種轉(zhuǎn)化的非人生物，包含權(quán)利要求19所述的表達(dá)盒。

23.權(quán)利要求22所述的轉(zhuǎn)化的生物，其中所述生物是真菌、動物或植物。