[實用新型]便潛血快速診斷的層析試紙

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201029151026.0
• 申請日: 2010-02-08
• 公開（公告）號: CN201607444U
• 公開（公告）日: 2010-10-13
• 發(fā)明（設計）人: 李洲;劉圍;楊發(fā)青
• 申請（專利權）人: 天津中新科炬生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/72
• 分類號: G01N33/72;G01N33/577;G01N33/558
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標代理有限公司 12103
• 代理人: 關永琴

技術領域

本實用新型涉及免疫膠體金法和化學法相結合，且兩種方法通過一點上樣，兩種路徑分別實現(xiàn)免疫膠體金法和化學法的檢測，通過兩層上樣墊和中間的一層隔離帶而使得兩種方法互不影響的一步法快速診斷層析試紙及其制備方法。

背景技術

糞便的潛血檢查，是指消化道出血量很少，肉眼不見血色，而且少量紅細胞又被消化分解以致顯微鏡下也無從發(fā)現(xiàn)的出血狀況。隱血便消化道少量出血可不引起大便顏色改變，只有靠大便隱血試驗才能確定。凡是消化道疾病引起少量出血的，均可有隱血便，因此潛血檢查對于診斷多種消化道出血性疾病都有重要價值，是普查篩選消化道疾病的有效手段，潛血實驗已經(jīng)成為人們不斷深入研究的熱點。

大便潛血的主要檢測方法有化學法和免疫學方法：

化學法種類繁多，常用的有鄰甲苯胺法、還原酚酞法、聯(lián)苯胺法、匹拉米洞法、愈創(chuàng)木脂法。其實驗設計原理都是基于人血紅蛋白中的含鐵血黃素部分有催化過氧化物分解的作用，能催化試劑中的過氧化物，分解釋放新生態(tài)的氧，氧化上述色原物質(zhì)而呈色，呈色的深淺反映血紅蛋白的多少。但是化學法缺乏準確性和特異性。外源性食物食品中如含有血紅蛋白、肌紅蛋白，其血紅素的作用均可以使實驗呈陽性，大量生食蔬菜中含有活性的植物過氧化物也可催化過氧化物分解，出現(xiàn)假陽性反應。血液在腸道中停留過久，血紅蛋白變性，則會出現(xiàn)與病情不符的陰性結果。此外，如果病人服用大量的維生素C或其他具有還原性的藥物，在實驗中可將過氧化物還原，從而不能氧化色原物質(zhì)，也可使實驗出現(xiàn)假陰性。

免疫學方法主要包括免疫單抗法、免疫斑點法、膠乳免疫化學凝聚法、放射免疫擴散法、反向間接血凝法、膠體金標記夾心免疫檢驗法等。此類試驗所用抗體分為兩大類，即抗人血紅蛋白抗體和抗人紅細胞基質(zhì)抗體，目前一般都采用抗人血紅蛋白抗體。近年來研發(fā)的膠體金免疫層析法，將單克隆技術與膠體金技術結合，利用抗人血紅蛋白的單克隆抗體與人血紅蛋白可以高度特異性結合的特點來檢測糞便隱血。此法不受動物的血、肉、含過氧化物酶的新鮮蔬菜、鐵劑、維生素C的影響，靈敏度高，反應快速，在臨床各類疾病導致出血的診斷中起到了較好的效果。用單克隆雙抗體夾心膠體金顯色技術，以試紙條一步法檢測便隱血，方法簡單、快速，具有很好的靈敏度和特異性。膠體金免疫層析試紙條因具有體積小、攜帶方便、不需要儀器設備、操作簡單、可現(xiàn)場檢測、3～10min出結果及結果可由肉眼根據(jù)T線顏色深淺判斷等諸多優(yōu)點而被廣泛應用。膠體金免疫層析法融合了免疫層析技術和膠體金顯色的原理，為特異快速的檢測糞便潛血建立了一種新的免疫學方法。該法是利用纖維膜的毛細作用，使待測物抗原沿表面向前運動，與待測區(qū)標記的捕獲物特異結合而聚集顯色。免疫層析一步法目前一般是用抗人血紅蛋白抗體來特異性結合人血紅蛋白抗原，此法簡便、快速，只特異地針對人血紅蛋白抗原表位，基本排除了飲食及藥物等因素的干擾，被世界衛(wèi)生組織胃腸鏡檢查協(xié)會推薦作為糞便潛血試驗的一種較為確認的方法。免疫膠體金法隱血試驗有一定的靈敏度，高于或低于此范圍均可出現(xiàn)假陰性。單克隆抗體膠體金法在檢測消化道出血有時候會漏診，其原因主要有：

①血紅蛋白經(jīng)過消化酶降解而變性，已不具有原來的免疫原性；

②過量的大出血而致使反應體系中抗原過剩，出現(xiàn)后帶現(xiàn)象；

③病人的血紅蛋白抗原與單克隆抗體不匹配。

到目前為止，單一的大便潛血FOB診斷方法的靈敏度和特異性都有待進一步提高。臨床上往往需要兩種或以上的方法聯(lián)合檢測。目前市場上已有相關的聯(lián)全檢測試劑出現(xiàn)。然而本專利涉及的采用膠體金免疫法和化學法結合檢測糞便潛血方法和其它聯(lián)測方法不同，能提高消化道出血的檢出率，并且為一步法，操作簡便。

發(fā)明內(nèi)容

本實用新型目的是提供一種簡便、準確、快捷、靈敏度和特異性高、適合于臨床診斷或篩查用的便潛血快速診斷試紙及其制備方法。

本實用新型免疫法運用雙抗體夾心免疫層析技術實現(xiàn)對被檢樣品中人血紅蛋白抗原的檢測，提供一種便潛血快速診斷的層析試紙，其特征在于在塑料支撐板7上緊密連接硝酸纖維素NC膜4，硝酸纖維素NC膜4包被有相互分離的檢測T線9和質(zhì)控C線10，所述T線為包被在NC膜上的人血紅蛋白單抗，所述C線為包被在NC膜上的羊抗鼠IgG抗體；在硝酸纖維素NC膜4的一端搭接吸樣墊5，硝酸纖維素NC膜4的另一端搭接含有標記人血紅蛋白單抗的膠體金墊8，膠體金墊8的另一端搭接上樣墊26，上樣墊26及膠體金墊8上搭接隔離帶3，隔離帶3連接上樣墊11，上樣墊11一端緊密搭接化學法便潛血檢測試紙2構成試紙。