[實(shí)用新型]HIV病毒耐藥性單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)裝置

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201020294006.1
• 申請(qǐng)日: 2010-08-17
• 公開（公告）號(hào): CN201756553U
• 公開（公告）日: 2011-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔大祥;王賢松
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué);蘇州康立達(dá)納米生物工程有限公司
• 主分類號(hào): C12M1/34
• 分類號(hào): C12M1/34;C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 上海衡方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31234
• 代理人: 包文超

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型涉及一種確定基因單堿基突變的裝置，尤其涉及一種檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性的裝置，及時(shí)了解患者體內(nèi)HIV病毒耐藥性狀況，為改變?cè)\療方案和藥物組合提供依據(jù)。

背景技術(shù)

人類免疫缺陷病毒（Human?immunodeficiency?virus，HIV）是導(dǎo)致獲得性免疫缺陷癥（Acquired?immunodeficiency?syndrome，AID）的病原體。受HIV病毒感染后，在體內(nèi)的潛伏期一般為1-12年，平均潛伏期為7-8年，極少數(shù)可以達(dá)到15年。個(gè)體在感染病毒后的幾周內(nèi)會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、肌關(guān)節(jié)痛、皮疹和頭痛等癥狀，然后大部分個(gè)體進(jìn)入無癥狀的病毒潛伏期，不易引起關(guān)注。此外，病毒的潛伏期時(shí)間較長，是的該疾病在全球范圍內(nèi)迅速傳播，對(duì)該病毒的檢測(cè)（現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志[J]，2004，19(6)，64-67；衛(wèi)生職業(yè)教育[J]，2008，20，149-151；中國國境衛(wèi)生檢疫雜志[J]，2009，32(4)，285-292），以及對(duì)由其引起的疾病進(jìn)行診斷和治療已成為臨床醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)和病毒學(xué)等多學(xué)科研究的熱點(diǎn)。

HIV病毒屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒，具有高度遺傳變異性，致使多種HIV抗病毒治療藥物都無法取得良好效果。及時(shí)了解患者的HIV耐藥性，對(duì)醫(yī)治艾滋病患者十分重要，對(duì)這個(gè)艾滋病疫情控制意義重大（全國免疫學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)新進(jìn)展研討會(huì)，362-365）。

中國發(fā)明專利ZL200510132118.0公開了一種檢測(cè)HIV對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑抗性的基因芯片，使用自動(dòng)點(diǎn)樣儀將96個(gè)探針點(diǎn)于由四個(gè)陣區(qū)組成的玻片上而成。在檢測(cè)之前，首先得到待檢樣品的cDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增后，利用隨機(jī)引物和熒光素Cy5-dCTP對(duì)純化片段進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記產(chǎn)物烘干后與雜交液混勻，變性后加在基因芯片的探針陣列上進(jìn)行雜交。之后按照離子強(qiáng)度由高到低的順序?qū)π酒M(jìn)行清洗。利用生物芯片專用的掃描儀讀取芯片上的熒光信號(hào)并利用相應(yīng)的生物芯片數(shù)據(jù)分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，根據(jù)對(duì)每一個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)的不同探針的熒光數(shù)據(jù)的比值來確定不同位點(diǎn)核苷酸的種類。通過對(duì)14個(gè)位點(diǎn)核苷酸的判斷，就可以達(dá)到對(duì)HIV進(jìn)行耐藥性位點(diǎn)突變情況檢測(cè)，從而完成其耐藥性檢測(cè)。該發(fā)明的技術(shù)方案對(duì)HIV病毒耐藥性檢測(cè)的時(shí)間較長，且步驟多，分析過程需要依賴專門的軟件，應(yīng)用的通用性不高。

中國發(fā)明專利申請(qǐng)200880008644.8公開了一種檢測(cè)HIV耐藥變異體的系統(tǒng)和方法。該方法適用于通過單核苷酸多態(tài)性（Single?Nucleotide?Polymorphism，SNP）來檢測(cè)和分析HIV病毒耐藥性相關(guān)的序列變異體。從HIV樣品群中各RNA分子生成復(fù)數(shù)個(gè)cDNA種類，并擴(kuò)增出數(shù)個(gè)第一擴(kuò)增子，由第一擴(kuò)增子產(chǎn)生復(fù)數(shù)個(gè)第二擴(kuò)增子，在單個(gè)儀器上平行測(cè)定來自至少100個(gè)固定化群的基本相同拷貝的核酸序列組合物，檢測(cè)該至少100個(gè)固定化群的核酸序列組合物中以5%或更低頻率出現(xiàn)的一個(gè)或更多個(gè)序列變異體，并將此與HIV耐藥性變異相關(guān)聯(lián)。該發(fā)明中并沒有提供一種便于應(yīng)用此方法的檢測(cè)裝置。

在當(dāng)前的研究性實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院臨床檢測(cè)室中，尚沒有一種針對(duì)HIV耐藥性檢測(cè)的裝置，以簡(jiǎn)化檢測(cè)過程，便于結(jié)果判斷，減少檢測(cè)時(shí)間和提高檢測(cè)效率。

實(shí)用新型內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的在于提供一種HIV病毒耐藥性單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)裝置，包括多個(gè)檢測(cè)單元，在生物檢測(cè)器的配合下，直接判斷與HIV病毒耐藥性相關(guān)的序列變異體，以簡(jiǎn)化檢測(cè)過程，便于結(jié)果判斷，減少檢測(cè)時(shí)間和提高檢測(cè)效率。

單核苷酸多態(tài)性主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中最常見的一種。占所有已知多態(tài)性的90%以上。SNP在人類基因組中廣泛存在，平均每500～1000個(gè)堿基對(duì)中就有1個(gè)，估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300萬個(gè)甚至更多。SNP所表現(xiàn)的多態(tài)性只涉及到單個(gè)堿基的變異，這種變異可由單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換(transition)或顛換(transversion)所引起，也可由堿基的插入或缺失所致。

本實(shí)用新型提供的一種HIV病毒耐藥性單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)裝置，包括對(duì)照部件和檢測(cè)部件。對(duì)照部件上結(jié)合有能與含有突變位點(diǎn)的待檢核酸分子互補(bǔ)結(jié)合的陽性對(duì)照核酸分子，或能與不含突變位點(diǎn)的待檢核酸分子互補(bǔ)結(jié)合的陰性對(duì)照核酸分子。檢測(cè)部件包括若干個(gè)檢測(cè)單元，每個(gè)檢測(cè)單元上結(jié)合有單一的探針分子，探測(cè)分子能與待檢核酸分子上單堿基突變位點(diǎn)互補(bǔ)結(jié)合。檢測(cè)單元的數(shù)量與單核苷酸多態(tài)性所具有的等位數(shù)的整數(shù)倍相一致。