[實(shí)用新型]甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201020142096.2
• 申請(qǐng)日: 2010-03-26
• 公開（公告）號(hào): CN201637744U
• 公開（公告）日: 2010-11-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李洲;楊發(fā)青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津中新科炬生物制藥有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/544
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司 12103
• 代理人: 關(guān)永琴

技術(shù)領(lǐng)域

本實(shí)用新型是涉及生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種以膠體金免疫層析法快速檢測(cè)甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙。

背景技術(shù)

甲型H1N1流感病毒是一種新型的流感病毒，2009年在世界范圍內(nèi)大流行，嚴(yán)重危害人類的健康。其“Ha”指的是血球凝集素(Hemagglutinin)、“Na”指的是神經(jīng)氨酸酶(Neuraminidase)，甲型流感病毒H有1～15型，有1～9型。H1N1是甲型流感病毒的一種，也是危害最大的病毒之一。在歷史上曾造成數(shù)次大流行。

目前對(duì)甲型H1N1流感檢測(cè)的主要方法是PCR基因擴(kuò)增診斷方法，鼻咽試紙抗原診斷方法等。在抗體檢測(cè)方面，有ELISA等檢測(cè)方法，但用膠體金類免疫層析技術(shù)對(duì)甲型H1N1總抗體進(jìn)行檢測(cè)尚未有相關(guān)報(bào)道。對(duì)H1N1總抗體檢測(cè)主要有已下作用：1：對(duì)H1N1流感進(jìn)行輔助診斷。根據(jù)“甲型H1N1流感診療方案”第三版，甲型H1N1流感病原學(xué)檢測(cè)方法之一為：動(dòng)態(tài)檢測(cè)雙份血清甲型H1N1流感病毒特異性抗體水平呈4倍或4倍以上升高，是感染H1N1流感病毒的指標(biāo)。2：對(duì)是否已感染H1N1進(jìn)行鑒別，隱性感染或感染過該病毒的人體內(nèi)抗H1N1病毒總抗體將長(zhǎng)期存在。3：對(duì)免疫接種的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，從數(shù)據(jù)上看，目前H1N1接種的有效率約為90％，尚有10％的人需要篩選出來重新接種或用其它方式進(jìn)行該病的預(yù)防。考慮到感染和接種的人群巨大，運(yùn)用一種快速、簡(jiǎn)便、有效的抗體檢測(cè)方法非常必要。

免疫層析膠體金技術(shù)是新型的診斷技術(shù)，在抗體檢測(cè)方面已得到較為廣泛運(yùn)用，基本原理如下：利用膠體金標(biāo)記一種抗原或抗體，在試劑的NC膜上包被相應(yīng)的配對(duì)抗原或抗體，檢測(cè)時(shí)當(dāng)樣品中含相應(yīng)的特異性抗體或抗原時(shí)，膠體金標(biāo)記顆粒和樣品中配體相結(jié)合形成復(fù)合物，然后在NC膜上層析，再被包被抗原或抗體捕獲，形成肉眼可見的檢測(cè)T線，通過檢測(cè)線的有無實(shí)現(xiàn)對(duì)結(jié)果的判定。具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本實(shí)用新型的目的是提供一種甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙，采用雙抗原夾心法制備，具有操作簡(jiǎn)便、反應(yīng)快速、敏感性高、特異性強(qiáng)、適合現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。

本實(shí)用新型提供一種甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙，其特征在于塑料支撐板7一端連接上樣墊1，上樣墊1的一端緊密壓接含有標(biāo)記H1N1特異性的血球凝集素Ha或H1N1特異性的血球凝集素Ha和神經(jīng)氨酸酶Na抗原的膠體金墊2，膠體金墊2一端緊密壓接硝酸纖維素NC膜3，硝酸纖維素NC膜3包被有相互分離的檢測(cè)T線5和質(zhì)控C線6，T線為包被在NC膜上的的H1N1特異性的血球凝集素Ha或H1N1特異性的血球凝集素Ha和神經(jīng)氨酸酶Na抗原，C線為包被在NC膜上的抗H1N1抗體，硝酸纖維素NC膜3的另一端連接吸樣墊4形成試紙。

所述的甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙，其特征在于所述的抗原為H1N1特異性的血球凝集素(Ha)和神經(jīng)氨酸酶(Na)抗原，抗原可以從H1N1病毒中純化提取或利用基因工程重組表達(dá)。

所述的甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙，其特征在于所述的上樣墊1為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊由吸水濾紙構(gòu)成4。

所述的甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的抗原的包被方法為：以0.01M?pH?7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將H1N1特異性的血球凝集素(Ha)和(或)神經(jīng)氨酸酶(Na)抗原配制成0.5-2mg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以1ul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被抗H1N1抗體作為C線，劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25℃，濕度小于30％，干燥2-5小時(shí)。

上述的甲型H1N1流感病毒總抗體檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的抗原標(biāo)記膠體金顆粒的方法為：以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為30-50nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml膠體金液放在燒杯內(nèi)，用0.2M?K₂CO₃調(diào)至pH8.0，按100ml膠體金溶液加入0.5-2mg?H1N1血球凝集素(Ha)和神經(jīng)氨酸酶(Na)抗原，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入1％牛血清白蛋白BSA，0.1％聚乙二醇PEG20000封閉20min，12000r/m離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復(fù)溶至100ml，按1ml溶液鋪22cm²的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜或無紡布上，再置干燥間，溫度20-25℃，濕度小于30％，干燥2-5小時(shí)，制成膠體金墊。