[發明專利]器官深低溫保存液

無效

• 申請號: 201019091008.2
• 申請日: 2010-02-08
• 公開（公告）號: CN102144629A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發明（設計）人: 肖傳國;潘峰
• 申請（專利權）人: 肖傳國;潘峰
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

深低溫保存方法被認為是實現器官長期保存的理想途徑，問題的關鍵是器官體積較大，在降溫和復溫過程中很難克服細胞內外冰晶形成，同時不能避免機械、化學、滲透壓以及生物學方面的損傷，所以至今較大體積器官的凍存問題仍未解決。腎臟是人體中機能復雜的器官，在4℃灌注條件下只能離體保存最多50小時。供腎如能在合適的深低溫條件下長期保存，將為臨床移植工作開辟一個嶄新的前景。

背景技術

近期以來，深低溫保存細胞、精子、胚胎甚至卵巢組織已先后取得成功，但是復雜器官例如腎臟的深低溫保存，卻依然是個尚未突破的難題。當今世界上，腎病患者的數量不斷增加，腎臟移植的技術也在迅速發展，這就需要大量的腎臟貯備和供應。目前臨床腎移植應用的供腎均是在0℃以上保存的，此方法雖然比較成熟、簡便，但保存時間有限，國內外學者從改進保存液水平及保存工具等方面著手延長腎臟保存的時間，或在有限的保存時間內完善組織配型工作，以提高供腎的合理使用率和移植后的長期存活率，但仍不能滿足臨床需求。此外，在國內供體器官缺少的情況下，由于配型、病人條件不符和地域等原因也會造成一定的器官資源浪費。能否在一個國家乃至整個世界范圍內共享人白細胞抗原(HLA)配型吻合的腎臟，使每一個受者都能及時得到最優化的供腎？對于這樣理想化的愿望，只有通過改進腎臟保存技術，延長供腎保存時間至數周甚至數年，并建立“器官庫”(Organ?Bank)才能最終實現。但是，要長時間保存供腎，必須進一步降低腎臟保存的溫度，抑制組織細胞的代謝率，甚至使細胞代謝完全停止。然后，在需要時將保存的供腎采用合適的手段經“復蘇”后再移植。

發明內容

本發明所述器官深低溫保存液，由二甲基亞砜、乙酰胺、葡萄糖、甘油、聚乙二醇等成份組成，二甲基亞砜、乙酰胺、葡萄糖、甘油濃度均為0.2～5mol/L，聚乙二醇濃度為1～20mmol/L。在器官生物細胞的能量代謝被完全抑制的深低溫條件下，本保存液可保護細胞形態結構完整性，使之處于休眠狀態，避免或減少深低溫對細胞的冰凍損害，用適當的條件復蘇后，可使細胞代謝活動恢復，發揮其生物學功能。本發明所述器官深低溫保存液，可用于腎臟的深低溫保存(-200℃～-20℃)，也可應用于其他器官的深低溫保存，實現器官長期保存的目標。

具體實施方式

將經本發明所述器官深低溫保存液灌注后的腎臟放入盛有保存液的凍存盒中，使用程序冷凍儀控制速率冷凍，降至-30℃或-80℃并保持1小時后，轉入-30℃或-80℃冰箱。保存30天后使用程序冷凍儀控制速率升溫至4℃，洗脫保存液進行相關組織病理學檢查及其他操作。

通過本發明所述器官深低溫保存液進行深低溫保存后的新西蘭大白兔腎臟，大體形態未見明顯冰凍損害，皮髓質結構清晰，光學顯微鏡下腎小球內毛細血管襻清晰可見，腎小球囊無擴張，腎小管上皮細胞輕微混濁腫脹，電子顯微鏡下腎小球濾過膜、足細胞和系膜細胞等超微結構完整，細胞核染色質濃密，胞質內細胞器數目正常，上皮細胞腔面刷狀緣微絨毛排列整齊，血管內皮細胞及彈性膜完整，顯示腎臟經深低溫保存后組織形態完整。

通過本發明所述器官深低溫保存液進行深低溫保存后新西蘭大白兔腎臟，離體灌注后進行酚紅排泌試驗(PSP試驗)、靛胭脂實驗測定腎小管功能，PSP15分鐘排泌量為28.5％，120分鐘排泌量為57.6％，均排泌量高于正常值(25％；55％)，靛胭脂灌注后片刻即可見到藍色尿液排出，顯示腎臟經深低溫保存后腎小管排泌功能正常。

通過本發明所述器官深低溫保存液進行深低溫保存后的比格犬腎臟，自體腎移植術后進行彩色多普勒超聲、發射單光子計算機斷層掃描(ECT)和靜脈分泌造影(IVP)等檢查，術后復查彩超可見移植腎臟內血流通過，IVP和ECT也顯示腎臟功能持續存在。