[發(fā)明專利]一種用于以HRP為酶促反應的化學發(fā)光底物液

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010623962.4
• 申請日: 2010-12-31
• 公開（公告）號: CN102156121A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設計）人: 謝晶;徐晶;那鑫
• 申請（專利權）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/52
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫分析領域，可應用于HRP為酶促反應的檢測體系，如免疫檢測體系、熒光檢測體系等。

背景技術

化學發(fā)光免疫分析技術在免疫檢測中已經(jīng)得到了廣泛的推廣，近幾十個品種在普遍應用，其范圍從普通的臨床檢驗品種到各種腫瘤標志物篩查、細胞因子、藥物等等，不僅在臨床檢驗，而且在藥物學、環(huán)境學、食品安全以及預防醫(yī)學都表現(xiàn)出了廣闊的應用前景。同時，化學發(fā)光免疫分析技術的簡便、快捷、靈敏等優(yōu)點使在基層對疾病的普查、診斷和療效考核都具有重要的價值。

在化學發(fā)光免疫分析中，通過免疫反應結(jié)合在微孔板內(nèi)的酶結(jié)合物的量直接反應了免疫結(jié)合的效率，該效率在標記抗體(抗原)和包被抗體(抗原)均過量的條件下，完全取決于待測的抗原(抗體)的濃度。由此而引起的發(fā)光信號強度(RLU)也就直接揭示了待測抗原(抗體)濃度的變化。

現(xiàn)有發(fā)光底物有效期短、本底高、不穩(wěn)定。發(fā)光底物的配方?jīng)Q定底物的這些特性，我們主要對發(fā)光底物配方進行了研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種反應時間短、檢測平臺期長、穩(wěn)定性好的底物系統(tǒng)，即一種化學發(fā)光底物液。

本發(fā)明的化學發(fā)光底物液主要由發(fā)光底物液A和發(fā)光底物液B組成；所述發(fā)光底物液A包括發(fā)光劑魯米諾和增強劑對碘苯酚；所述發(fā)光底物液B包括氧化劑過氧化脲。

具體地，所述發(fā)光底物液A含有如下組分：

魯米諾???????????0.08-0.12mg/ml

對碘苯酚?????????2.8-3.2mg/ml

甘氨酸???????????0.02-0.04％

牛血清白蛋白?????0.008-0.012％。

優(yōu)選地，所述發(fā)光底物液A含有如下組分：

魯米諾???????????0.1mg/ml

對碘苯酚?????????3mg/ml

甘氨酸???????????0.03％

牛血清白蛋白?????0.01％。

所述發(fā)光底物液A還含有緩沖系統(tǒng)，所述緩沖系統(tǒng)選自0.05M磷酸鹽緩沖液、0.05M?Tris-HCl緩沖液和0.2M硼酸鹽緩沖液中的一種，pH8.3-8.9；優(yōu)選地，所述緩沖系統(tǒng)為0.2M硼酸鹽緩沖液，pH8.6。

具體地，所述發(fā)光底物液B含有如下組分：

過氧化脲?????????0.08-0.12mg/ml

苯甲酸鈉?????????0.01-0.03％。

優(yōu)選地，所述發(fā)光底物液B含有如下組分：

過氧化脲?????????0.1mg/ml

苯甲酸鈉?????????0.02％。

所述發(fā)光底物液B還含有緩沖系統(tǒng)，所述緩沖系統(tǒng)選自0.05M磷酸鹽緩沖液、0.05M?Tris-HCl緩沖液和0.2M硼酸鹽緩沖液中的一種，pH8.3-8.9；優(yōu)選地，所述緩沖系統(tǒng)為0.2M硼酸鹽緩沖液，pH8.6。

本發(fā)明的化學發(fā)光底物液可以用于以HRP為酶促反應的檢測系統(tǒng)。使用時，發(fā)光底物液A與發(fā)光底物液B的體積比為2-3∶3-2；優(yōu)選地，發(fā)光底物液A與發(fā)光底物液B的體積比為1∶1。在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明是針對辣根過氧化物酶(HRP)的魯米諾化學發(fā)光體系(反應原理見下式)。

檢測系統(tǒng)是由發(fā)光底物液A和發(fā)光底物液B組成。發(fā)光底物液A含有發(fā)光劑魯米諾和增強劑對碘苯酚，底物液B中含有氧化劑過氧化脲。底物的穩(wěn)定性、靈敏度以及檢測方式?jīng)Q定了是否有利于臨床免疫分析。以此目的為研究方向，發(fā)明人對化學發(fā)光底物液的緩沖體系，主要原料的濃度，以及配方進行了研究和優(yōu)化，較目前商品化的底物有明顯的改進。主要體現(xiàn)在反應時間短、檢測平臺期長、穩(wěn)定性好等性能上。

緩沖體系的選擇及優(yōu)化：分別對磷酸鹽、Tris-HCl、硼酸鹽等緩沖系統(tǒng)進行了穩(wěn)定性、靈敏度等性能測試，根據(jù)測試結(jié)果優(yōu)選pH8.6的硼酸鹽緩沖液。其配制方法為：配制0.05M硼砂溶液和0.2M硼酸溶液，然后按11∶9的體積比量取硼砂溶液和硼酸溶液，混合后即得pH8.6硼酸鹽緩沖液。

不同增強劑、穩(wěn)定劑的選擇及優(yōu)化：對碘苯酚、過硼酸鈉、甘氨酸、牛血清白蛋白等多種增強劑和穩(wěn)定劑等物質(zhì)對檢測結(jié)果的影響，并對其使用濃度進行了優(yōu)化；然后進行穩(wěn)定性、靈敏度等性能測試，最終確定包括增強劑、穩(wěn)定劑(甘氨酸、牛血清白蛋白)等物質(zhì)在內(nèi)的發(fā)光底物液A和發(fā)光底物液B優(yōu)選的和最優(yōu)選的組分及其濃度配比。