[發(fā)明專利]一種富集純化狼毒中狼毒素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010623134.0
• 申請日: 2010-12-20
• 公開（公告）號: CN102093327A
• 公開（公告）日: 2011-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姚德坤;姚德利;閆峰;黃運生;劉德文;姚航;鄭君
• 申請（專利權(quán)）人: 大興安嶺林格貝有機食品有限責任公司
• 主分類號: C07D311/32
• 分類號: C07D311/32;C07D311/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于天然有機化學領(lǐng)域，涉及一種狼毒素的純化方法，特別是涉及一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法。

背景技術(shù)：

狼毒又叫續(xù)毒、綿大戟、山蘿卜、悶花頭、熱加巴、一掃光、搜山虎、一把香、藥羅卜，有毒性，為瑞香科植物瑞香狼毒或大戟科植物狼毒大戟、月腺大戟的根。根含二萜、黃酮、木脂素、香豆精類成分，包括狼毒素(chamaejasmin)A、B、C，狼毒素、異狼毒素(isochamaejasmin)，7-甲氧基狼毒素(7-methoxychamaejasmin)，新狼毒素(neochamaejasmin)A、B，狼毒色酮(chamaechromone)及二氫山柰酚(dihydrokaempfero1)等。植物狼毒的根入藥具有瀉水逐飲、破積殺蟲之功效；現(xiàn)代研究表明，中藥狼毒亦具有抗癌的作用。

狼毒素臨床上用于治療皮膚病，結(jié)核病，腫瘤以及慢性氣管炎等。近年來，人們發(fā)現(xiàn)天然植物狼毒中含有大量的狼毒素，由于其原料狼毒可大片繁殖，易于栽種，來源較廣，從中提取狼毒素已取得了可喜進展。名稱為“一種瑞香狼毒提取物制劑及其新用途”的專利申請中便公開了將狼毒經(jīng)有機試劑直接浸提狼毒提取物工藝流程。上述專利文獻中的狼毒素提取工藝主要是經(jīng)過用有機試劑浸提等步驟提取而成，其分離效果遠遠不如間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法處理后在進行硅膠柱層析分離的效果。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對較低、提取純度低等缺點，提供一種利用間歇蒸餾大孔吸附樹脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種利用間歇蒸餾-大孔吸附樹脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法，其步驟如下：

(1)將干狼毒粉碎后用甲醇加熱回流提取；

(2)將經(jīng)步驟(1)處理的狼毒提取液抽濾，將提取液減壓回收甲醇得初提物；

(3)將所獲初提物用酸調(diào)其PH值為2.0～2.5，靜置、抽濾、并用水洗滌至中性，減壓濃縮得狼毒素粗提物；

(4)將所得狼毒素粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附；

(5)用不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集狼毒素各階段洗脫液；

(6)將狼毒素各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得狼毒素半成品，其含量為35％以上；

(7)將所得狼毒素半成品上硅膠層析柱，并以丙酮，甲醇以不同體積比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集狼毒素各階段洗脫液；

(8)將所收集的狼毒素洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得狼毒素，其含量在95％以上。

所述的步驟(1)中，狼毒粉碎后過40～80目篩在進行有機溶劑提取。

所述的步驟(1)中，甲醇濃度為75％，提取時間為3～4小時，可提取2～3次。

所述的步驟(1)中，提取的方法為浸泡法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、連續(xù)提取法中的一種或一種以上。

所述的步驟(1)中，加入甲醇的體積為狼毒粉碎體積的5～10倍。

所述的步驟(3)中，調(diào)節(jié)PH值所用的酸為磷酸。

所述的步驟(4)中所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、S-8、D?3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。

所述的步驟(5)中所述的洗脫為用30～90％的乙醇進行洗脫。

所述的在步驟(5)和(7)中，所采取的檢測方法均為薄層色譜法跟蹤檢測。

所述的步驟(7)中所采取的丙酮與甲醇的體積為1～7∶1。

本發(fā)明應(yīng)用間歇蒸餾-大孔吸附技術(shù)耦合分離純化狼毒素，對狼毒素的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35％以上的狼毒素半成品和含量95％以上的狼毒素終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點。

本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機械強度高、抗污染能力強、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不容于酸、堿及有機媒，對有機物選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附狼毒素，吸附快、解析也快，吸附容量較大。

具體實施方式：

實施例1：一種利用間歇蒸餾大孔吸附樹脂耦合法富集純化狼毒中狼毒素的方法，其步驟如下：