[發(fā)明專利]一種鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010622840.3
• 申請日: 2010-12-31
• 公開（公告）號: CN102174635A
• 公開（公告）日: 2011-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳英杰;秦松;吳寧;崔玉琳;姜鵬;陳華新;李富超
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;G01N21/64
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因重組蛋白和納米材料的應(yīng)用領(lǐng)域，具體說是一種鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒的應(yīng)用。

背景技術(shù)

細胞凋亡在保證多細胞生物的健康生存過程中扮演著關(guān)鍵角色，對個體的正常發(fā)育及細胞凋亡紊亂在病理學研究中的重要作用，引起了人們對其機制和組分的廣泛而深入地研究，成為目前生命科學界最為熱門話題之一，也是生命科學界乃至社會各界爭相投入的研究領(lǐng)域。隨著這方面研究的持續(xù)升溫，涌現(xiàn)出了大量新的技術(shù)和方法對細胞凋亡進行檢測，商品化的產(chǎn)品出現(xiàn)也大大加速了研究的進程。其中，凋亡細胞的早期檢測，主要通過細胞表面磷脂酰絲氨酸的表達作為免疫識別標志，可以通過一系列Annexin?V產(chǎn)品，結(jié)合熒光標記技術(shù)和流式細胞儀進行檢測。

隨著納米技術(shù)的快速發(fā)展，磁性納米粒子以其獨特的尺寸效應(yīng)和磁場操作特性，在生物醫(yī)學領(lǐng)域受到了廣泛的關(guān)注。通過不同的功能化修飾，結(jié)合熒光標記，酶聯(lián)免疫以及信號放大等技術(shù)，越來越多的多功能磁性納米粒子應(yīng)運而生。中國專利“一種鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒的制備方法，201010261766.7，2010.08.20”，提供了一種結(jié)合基因重組技術(shù)和納米技術(shù)的鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒，為生物活性物質(zhì)提供新技術(shù)的同時，也為凋亡細胞的可視化富集、分離提供了新的工具。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒的應(yīng)用。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒的應(yīng)用，采用鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒檢測凋亡細胞。

將鏈酶親和素修飾的熒光磁性納米顆粒投加于含有生物素標記凋亡細胞的細胞懸浮液中，通過酶聯(lián)免疫反應(yīng)，使鏈酶親和素修飾的熒光磁性納米顆粒特異結(jié)合生物素標記的凋亡細胞，并于磁力作用下(即外置磁鐵)分離出與凋亡細胞特異性結(jié)合鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒。

將上述分離出的與凋亡細胞特異性結(jié)合鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒進行離心去除游離的顆粒，即得到凋亡細胞特異性結(jié)合鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒。

所述與含有生物素標記的凋亡細胞特異性結(jié)合的鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒是，將3.0-4.0毫克鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒投入1-3毫升含鏈酶親和素的PBS溶液中，室溫振蕩5-10分鐘后，用PBS洗三次后，待用；所述含鏈酶親和素的PBS溶液為每毫升PBS溶液內(nèi)含0.01mg鏈酶親和素。所述含有生物素標記凋亡細胞將8-10微升濃度為0.1mg/ml的Annexin?V-biotin加入1毫升約含1×10⁶個細胞的懸浮液中，室溫培育10-15分鐘后，280-300g離心5-6分鐘，而后用PBS洗三次后，即得到含有生物素標記凋亡細胞的細胞懸浮液。所述通過磁分離實現(xiàn)游離的鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒及與凋亡細胞特異性結(jié)合的鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒的分離后，再通過280-300g，5-6分鐘的離心處理去除游離的顆粒，得到與凋亡細胞特異性結(jié)合的鏈酶親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒。

本發(fā)明所具有的優(yōu)點：本發(fā)明采用鏈霉親和素結(jié)合功能熒光磁性納米顆粒作為工具，結(jié)合酶聯(lián)免疫技術(shù)實現(xiàn)了凋亡細胞的識別分離及成像，充分利用了鏈霉親和素-生物素之間的特異結(jié)合作用及信號放大作用，以及鏈霉親和素結(jié)合功能磁性納米顆粒的磁分離特性及熒光成像作用，實現(xiàn)了凋亡細胞的可視化富集、分離和成像。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例提供的待分離細胞懸浮液涂片成像圖，其中a，可見光成像，b，熒光成像。

圖2為本發(fā)明實施例提供的鏈霉親和素修飾熒光磁性納米顆粒的涂片成像圖，其中a，可見光成像，b，熒光成像。

圖3為本發(fā)明實施例提供的顆粒與細胞懸浮液共培育后10-15分鐘后，懸浮液涂片成像圖，其中a，可見光成像，b，熒光成像。

圖4為本發(fā)明實施例提供的磁分離游離的未結(jié)合細胞的顆粒及顆粒-凋亡細胞復(fù)合物的混合物成像圖，其中a，可見光成像，b，熒光成像。

圖5為本發(fā)明實施例提供的離心去除游離顆粒后，顆粒-凋亡細胞復(fù)合物成像圖，其中a，可見光成像，b，熒光成像。

具體實施方式

實施例1