[發(fā)明專利]一種快速磁分離法主導(dǎo)的肝癌甲胎蛋白變異體檢測(cè)試劑盒

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010619363.5
• 申請(qǐng)日: 2010-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN102147415A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳復(fù)華;梁曉飛;王維林;薛建祥;洪錦興;許凱黎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N21/76;G01N21/64
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 鄔震中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于納米材料應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種快速磁分離法主導(dǎo)的肝癌甲胎蛋白變異體(AFP-L3)檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

在世界范圍內(nèi)，乙肝病毒和丙肝病毒肝炎及肝硬化是肝細(xì)胞肝癌(HCC)的重要危險(xiǎn)因素，90％以上的HCC患者被檢出乙肝病毒。我國(guó)是肝癌高發(fā)國(guó)家，每年約11萬(wàn)患者死于HCC，這相當(dāng)于整個(gè)世界死于HCC患者的45％。臨床肝癌發(fā)現(xiàn)時(shí)多已晚期，治療難度大，手術(shù)并發(fā)癥多，療效通常不好，生存期短，一般發(fā)病后生存時(shí)間僅為6個(gè)月到一年。所以，在肝癌防治中，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷和早期治療就顯得尤為重要。

甲胎蛋白(AFP)作為HCC的診斷及療效隨訪觀察指標(biāo)已應(yīng)用多年，由于AFP不夠特異從而限制了HCC早期診斷的價(jià)值，但AFP對(duì)HCC可疑患者(指高危人群中)的篩選還是有效的。上世紀(jì)八十年代，上海市腫瘤研究所許凱黎研究員等最早采用扁豆凝集素(LCA)親和放射免疫電泳方法，檢測(cè)HCC病人血清中AFP-L3。發(fā)現(xiàn)良性肝病時(shí)肝細(xì)胞壞死后再生時(shí)產(chǎn)生的AFP糖鏈結(jié)構(gòu)，與HCC時(shí)產(chǎn)生的AFP糖鏈結(jié)構(gòu)上有明顯差異。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)AFP-L3在兩支鏈復(fù)合型糖鏈的還原末端側(cè)的N-乙酰葡萄糖胺上結(jié)合著α-1-6-巖藻聚糖，該糖鏈結(jié)構(gòu)能特異性結(jié)合LCA。研究人員將AFP分為L(zhǎng)CA非結(jié)合型：AFP-L1主要存在于良性肝病中、AFP-L2來自孕婦，LCA結(jié)合型：AFP-L3為HCC所特有，揭示了AFP-L3是HCC惡性程度的一個(gè)重要標(biāo)志。在HCC的早期診斷中檢測(cè)AFP-L3是非常有效的。據(jù)報(bào)道，AFP-L3在小肝癌(＜2cm)可以有35％的陽(yáng)性率，AFP-L3比影像學(xué)檢查可以提前9-12個(gè)月發(fā)現(xiàn)HCC的存在。對(duì)良性肝病特異性≥95％。AFP-L3的敏感性與HCC的臨床分期相關(guān)：AFP-L3用于檢測(cè)HCC的總的敏感性大約在60％左右之間。在直徑小于2cm肝癌中，其敏感性只有35-45％。隨著HCC的增大，AFP-L3的敏感性也隨之升高。當(dāng)HCC的直徑≥5cm時(shí)，AFP-L3的敏感性可高達(dá)80-90％。AFP-L3陽(yáng)性的HCC?存在早期血管浸潤(rùn)和肝內(nèi)轉(zhuǎn)移的傾向。如果α-連環(huán)蛋白缺失，那么HCC常常有肝外的轉(zhuǎn)移。影像學(xué)研究發(fā)現(xiàn)AFP-L3陽(yáng)性的HCC通常有豐富的肝動(dòng)脈血液供給，腫瘤的倍增時(shí)間較短。這就提示了AFP-L3陽(yáng)性的HCC生長(zhǎng)的非常快并且容易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移。AFP-L3對(duì)肝癌的診斷具有很高的準(zhǔn)確率。HCC的早期發(fā)現(xiàn)可以為患者提供更多的治療機(jī)會(huì)，如肝癌治療最有效的外科切除術(shù)，介入治療等。

目前，我國(guó)政府正式將AFP-L3檢測(cè)納入醫(yī)保項(xiàng)目，人們期待操作簡(jiǎn)便、快速、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好的AFP-L3檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種磁分離法主導(dǎo)的快速肝癌甲胎蛋白變異體(AFP-L3)檢測(cè)試劑盒，

本發(fā)明還提供一種上述磁分離法主導(dǎo)的快速肝癌甲胎蛋白變異體(AFP-L3)檢測(cè)試劑盒的制備方法。

本發(fā)明的另外一個(gè)目的是提供一種上述磁分離法主導(dǎo)的快速肝癌甲胎蛋白變異體(AFP-L3)檢測(cè)試劑盒的用途。

本發(fā)明的磁分離法主導(dǎo)的快速肝癌甲胎蛋白變異體(AFP-L3)檢測(cè)試劑盒含有如下的物質(zhì)：含有凝集素修飾的磁珠作為固相載的緩沖液、清洗緩沖液和洗脫緩沖液。進(jìn)一步的描述如下：一種磁分離法主導(dǎo)的快速肝癌甲胎蛋白變異體的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有如下物質(zhì)：(1)一種含有0.5％-10％重量的凝集素修飾的磁珠作為固相載體的pH為7.1-7.9的緩沖液，其中凝集素修飾的磁珠和其上所含的凝集素的重量百分比為4-200∶1；所述的緩沖液含有25mM的三羥甲基氨基甲烷-鹽酸(Tris-Hcl)、25mM的氯化鈉(NaCl)、2mM的氯化鎂(MgCl₂)和2mM的氯化鈣(CaCl₂)的水溶液；(2)一種pH為7.1-7.9的清洗緩沖液，上述的清洗緩沖液含有50mM的Tris-Hcl、50mM的NaCl、2mM的MgCl₂和2mM的CaCl₂的水溶液；(3)和一種pH為6.5-7.0的洗脫緩沖液；上述的洗脫緩沖液含有0.25M的甲基-a-D-甘露糖(Ethyl-a-Mannopyranoside)、50mM的Tris-Hcl和0.5M的NaCl的水溶液。