[發(fā)明專利]一種3′-唾液酸乳糖的制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010617331.1
• 申請(qǐng)日: 2010-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN102154163A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 朱莉
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12P19/12;C12R1/19
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

1.一種產(chǎn)3′-唾液酸乳糖的菌株，分類命名為大腸桿菌（Escherichia?coli）K235?WXJYL-11，已經(jīng)在中國典型培養(yǎng)物保藏中心進(jìn)行專利保藏，保藏編號(hào)CCTCC?NO：M208088。

2.用權(quán)利要求1所述菌株發(fā)酵制備3′-唾液酸乳糖的方法，其特征在于工藝為：

（1）高密度培養(yǎng)：以大腸桿菌CCTCC?NO：M208088為出發(fā)菌種，在發(fā)酵罐中添加發(fā)酵培養(yǎng)基，接種量為4%，整個(gè)發(fā)酵過程維持溫度30-37℃，通氣量1-1.5?vvm，攪拌轉(zhuǎn)速為600-800?r/min；在發(fā)酵過程中流加堿液氨水控制pH為6-7，發(fā)酵周期為32-48小時(shí)；發(fā)酵2-6小時(shí)后開始添加補(bǔ)料培養(yǎng)基，直至發(fā)酵結(jié)束前半小時(shí)停止添加，添加補(bǔ)料培養(yǎng)基的體積數(shù)與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積數(shù)相當(dāng)，以均速加入發(fā)酵體系內(nèi)；

發(fā)酵培養(yǎng)基成分g/L：山梨醇?30，乳糖20，硫酸銨2.5，三水合磷酸氫二鉀?2.5，MgSO₄?0.9，胰蛋白胨?1.5；

補(bǔ)料培養(yǎng)基成分g/L：山梨醇?400，硫酸銨?50；

（2）流加乳糖：配置10-20g/L的乳糖溶液；在發(fā)酵16-20小時(shí)后，以發(fā)酵體系計(jì)0.5-5?g/L的恒定速率向發(fā)酵罐中流加乳糖溶液直至發(fā)酵結(jié)束前5-10小時(shí)停止流加；

（3）離心除菌：發(fā)酵結(jié)束后，取步驟（2）所得發(fā)酵液80℃加熱處理30分鐘，然后以6000?rpm離心10分鐘除去菌體，得到含有唾液酸乳糖的上清液1和菌泥；

（4）菌體加熱裂解：將步驟（3）所得菌泥加水稀釋3～5倍，沸水浴加熱45-60分鐘，然后以10000rpm離心10分鐘除去細(xì)胞碎片，得到含有唾液酸乳糖的上清液2；

（5）離子交換樹脂吸附和脫吸：將步驟（3）所得上清液1和步驟（4）所得上清液2合并，加熱至80-90℃，恒溫加熱15分鐘；用截留分子量1000Da的膜進(jìn)行超濾，收集濾出液；用截留分子量500Da超濾膜處理濾出液，收集處理后的截留液；將截留液通入陽離子交換樹脂柱，用水洗脫，把培養(yǎng)基中的乳糖和產(chǎn)物3′-唾液酸乳糖分開，收集富含3′-唾液酸乳糖的洗脫液；

（6）真空干燥：將步驟（5）所得洗脫液進(jìn)行真空濃縮，然后再進(jìn)行噴霧干燥，即獲得產(chǎn)品3′-唾液酸乳糖。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述3′-唾液酸乳糖的制備方法，其特征在于步驟（5）所述陽離子交換樹脂為Diaion?UBK?530，即酸磺化聚苯乙烯-二乙烯基苯Na型或K型樹脂。