[發(fā)明專利]一種長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010617000.8
• 申請日: 2010-12-31
• 公開（公告）號: CN102146343A
• 公開（公告）日: 2011-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳海燕;周勛波;畢建杰
• 申請（專利權(quán)）人: 吳海燕
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法。適用于植物線蟲生防菌，動物寄生線蟲生防菌及微生物學(xué)等研究.

背景技術(shù)

自然界中存在一部分可以捕食、寄生或定殖于線蟲上的真菌，這類真菌為食線蟲真菌。其中通過營養(yǎng)菌絲特化的捕食器官如粘性菌絲，粘性分枝，粘性網(wǎng)，粘性球，收縮環(huán)及非收縮環(huán)來捕捉線蟲，這一類食線蟲真菌為捕食線蟲真菌。捕食線蟲真菌是對植物寄生線蟲的防治具有潛在能力的一類生防菌。但研究人員在研究的過程中，對分離出的菌株進(jìn)行進(jìn)一步研究時，涉及到菌種的保存問題。因此，一個好的保存方法對其研究具有重要的意義。

常用的保存法為試管斜面培養(yǎng)基。其方法是將待保存菌種接入PDA或玉米粉瓊脂試管培養(yǎng)基內(nèi)斜面，在25℃下培養(yǎng)2-3天，然后置于4℃條件下保存。這種保存方法存在的不足是：保存時間短，僅為半年，且很容易受螨類污染，占用空間大，易破碎，不易攜帶，轉(zhuǎn)管頻率高，成本相對高，易降低真菌的捕食能力，影響研究進(jìn)展。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)保存方法的不足，提供一種長期保持捕食線蟲真菌活性的保存方法，利用飽和含水量的自然土壤在離心管內(nèi)尤其是在微量離心管內(nèi)長期保存捕食線蟲真菌，捕食線蟲在接近自然條件下，保持其活性，延長保存時間，從而用于進(jìn)一步研究。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

第一步：培養(yǎng)基的制備

在離心管中裝入三分之一管體積的飽和含水量的自然土壤，用鋁箔包裹離心管，在121℃條件下對離心管和內(nèi)部的土壤高壓滅菌1小時即刻。

第二步：待存菌種的培養(yǎng)與保存

在無菌條件下，將需要保存的菌種轉(zhuǎn)入離心管中的土壤表面，蓋緊蓋子，在25℃下培養(yǎng)2天，然后將培養(yǎng)好的菌種連同離心管在4℃條件下保存即可。

為了使保存菌種便于保存和攜帶，所述的離心管為1.5ml的微量離心管(英文名稱eppendorf管，簡稱EP管)。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是：

1、通過利用飽和含水量的土壤對菌種保存，其條件接近菌種在培養(yǎng)基的水分條件，其中的土壤更接近捕食線蟲真菌的自然生存環(huán)境，所以保存時間長。

2、避免了現(xiàn)有保存方法因多次轉(zhuǎn)管而降低真菌的捕食能力，在保存期間管中帶菌土壤可多次使用，克服了常規(guī)保存方法易被螨類取食污染，保存時間短等不足，為研究該菌種提供了便利。

3、利用EP管保存易攜帶，輕便，體積小，不易破碎，不易污染，保存基質(zhì)來源廣，易獲得，成本低，保存期長。

為了驗(yàn)證本發(fā)明保存方法菌種的活力，在同等條件下利用本發(fā)明保存方法和現(xiàn)有保存方法進(jìn)行比較試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)利用本發(fā)明保存方法可以使捕食線蟲真菌活性保存保持至少1年，而利用現(xiàn)有保存方法可以使捕食線蟲真菌活性保存僅保持半年，這說明本發(fā)明方法保存遠(yuǎn)優(yōu)于現(xiàn)有保存方法。

具體實(shí)施方法

下面結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明保存方法的步驟。

第一步：制備飽和含水量的土壤

沿著漏斗內(nèi)表面鋪一層定性濾紙，讓濾紙吸足水，將土壤放入漏斗內(nèi)部(不要超過濾紙邊緣)，逐漸加水，直到濾紙折角處有一滴水且未滴下為止。

第二步：利用飽和含水量土壤制備培養(yǎng)基

將制備好的土壤用藥匙轉(zhuǎn)入1.5ml?eppendorf管(簡稱EP管)中，土壤的量占EP管體積的三分之一，將EP敞口用鋁箔包裹，小心放入高壓滅菌鍋中，，在121℃溫度、20磅壓力條件下滅菌1小時。

第三步：待存菌種的培養(yǎng)和保存

在無菌條件下，將需要保存的菌種轉(zhuǎn)入EP管中土壤表面，蓋緊蓋子，在25℃下培養(yǎng)2天，然后將其放入冰箱在4℃條件下保存即可。