[發(fā)明專利]即配即用型的胰蛋白酶制劑

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010613681.0
• 申請日: 2010-12-30
• 公開（公告）號: CN102533704A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李素霞;趙致;馮矗
• 申請（專利權(quán)）人: 上海雅心生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N9/76
• 分類號: C12N9/76;C12N5/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及即配即用型的胰蛋白酶制劑。

背景技術(shù)

胰蛋白酶溶液易自身降解，一般使用之前配制，無菌過濾后，馬上使用。但由于胰蛋白酶溶液是細(xì)胞消化使用的一個常用的試劑，所以，現(xiàn)在市場上有配制好的胰蛋白酶細(xì)胞消化液。

細(xì)胞消化液的主要成分為胰蛋白酶，目前市場上的細(xì)胞消化液均為溶液，運輸及儲存均需在低于4℃的條件下進行，如運輸及儲存不當(dāng)，極易失活，失活后即喪失消化能力，導(dǎo)致使用時細(xì)胞消化的效果不穩(wěn)定。

并且，目前市場上的胰蛋白酶細(xì)胞消化液均以其中含有的胰蛋白酶的重量來計算，而不以其單位活性來計算，因此其用于細(xì)胞消化時由于單位活性不清楚而導(dǎo)致無法精確地確定正確的用量。

因此，本領(lǐng)域目前迫切地需要改善胰蛋白酶制劑的配制和使用現(xiàn)狀，找到一種更為合適的、準(zhǔn)確的胰蛋白酶制劑的配制和使用方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種即配即用型的胰蛋白酶制劑。

在本發(fā)明的第一方面，提供一種胰蛋白酶制劑組合，包括：

(1)一胰蛋白酶凍干粉，所述對胰蛋白酶凍干粉由胰蛋白酶液直接凍干或加入甘露醇或海藻糖后凍干制成；和

(2)一溶劑，所述的溶劑中包括：細(xì)胞平衡液，以及終濃度為0.001-0.01％(w/v)的EDTA。

在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞平衡液中不包括：Ca²⁺，Mg²⁺離子。

在另一優(yōu)選例中，制備所述的胰蛋白酶凍干粉時，以0.1-10％(w/v)的終濃度加入所述的甘露醇或海藻糖。

在另一優(yōu)選例中，制備所述的胰蛋白酶凍干粉時，以0.5-6％(w/v)的終濃度加入所述的甘露醇或海藻糖。

在另一優(yōu)選例中，制備所述的胰蛋白酶凍干粉時，以1-5％(w/v)的終濃度加入所述的甘露醇或海藻糖。

在另一優(yōu)選例中，所述的溶劑中包括：終濃度為0.003-0.008％(w/v)的EDTA。

在本發(fā)明的另一方面，提供所述的胰蛋白酶制劑組合的用途，用于制備酶解或消化細(xì)胞的試劑盒。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種胰蛋白酶凍干粉，所述的胰蛋白酶凍干粉由胰蛋白酶液加入甘露醇或海藻糖后凍干制成。

在另一優(yōu)選例中，制備所述的胰蛋白酶凍干粉時，以0.5-6％(w/v)的終濃度加入所述的甘露醇或海藻糖。

在另一優(yōu)選例中，制備所述的胰蛋白酶凍干粉時，以1-5％(w/v)的終濃度加入所述的甘露醇或海藻糖。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種溶劑，所述的溶劑中包括：細(xì)胞平衡液，以及終濃度為0.001-0.01％(w/v)的EDTA。

在另一優(yōu)選例中，所述的溶劑中包括：終濃度為0.003-0.008％(w/v)的EDTA。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于酶解或消化細(xì)胞的溶液，由所述的胰蛋白酶凍干粉和所述的溶劑混合而成。

在另一優(yōu)選例中，所述的溶液中胰蛋白酶的酶活性為500-15000單位(U)；或

在另一優(yōu)選例中，所述的胰蛋白酶液的酶活性為1000-12000單位(U)。

在另一優(yōu)選例中，所述的胰蛋白酶液的酶活性為1000-10000單位(U)。

在另一優(yōu)選例中，所述的胰蛋白酶液的酶活性為1000-6000單位(U)。

在另一優(yōu)選例中，所述的胰蛋白酶液的酶活性為1500-3000單位(U)。

在另一優(yōu)選例中，所述的溶液中EDTA的終濃度為0.001-0.01％(w/v)。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種酶解或消化細(xì)胞的方法，所述方法包括：采用所述的用于酶解或消化細(xì)胞的溶液處理需要酶解或消化的細(xì)胞。

在本發(fā)明的另一方面，提供一種試劑盒，其包括所述的試劑組合。

在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括使用說明書。

本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。

附圖說明

圖1顯示了采用本發(fā)明的酶蛋白制劑消化細(xì)胞的結(jié)果。其中，

I.消化1～2min，細(xì)胞間隙增大，細(xì)胞變形，加入培養(yǎng)基，終止消化。

II.細(xì)胞經(jīng)懸浮后，基本呈單個細(xì)胞狀態(tài)，無成團現(xiàn)象。

III.細(xì)胞經(jīng)貼壁生長2d后，基本單個生長，無成團現(xiàn)象。

具體實施方式