[發明專利]雞新城疫、禽流感(H9亞型)、傳染性法氏囊病三聯滅活疫苗的生產方法

無效

• 申請號: 201010611987.2
• 申請日: 2010-12-29
• 公開（公告）號: CN102139104A
• 公開（公告）日: 2011-08-03
• 發明（設計）人: 宮曉;李陸梅;李昌友;王紅;徐寶娟
• 申請（專利權）人: 青島易邦生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/17;A61K39/145;A61K39/12;A61P31/14;A61P31/16
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明是一種用于預防雞的新城疫、禽流感(H9亞型)、傳染性法氏囊病三種疫病的油乳劑疫苗制備方法，屬于獸用生物制品領域。

背景技術

雞新城疫(newcastle?disease，ND)具有很高的發病率和病死率，世界各地多有發生，且一旦爆發將給禽養殖業帶來毀滅性打擊，是危害養禽業的一種主要傳染病。OIE將其列為A類疫病(殷震、劉景華，1997.動物病毒學.北京.科學出版社)。

禽流感(H9亞型)(Avain?Influenza?H9?subtype)是由禽流感病毒(Avain?Influenza?virus)引起的、主要流行于動物和人類中的一種傳染性、死亡率高的急性、高度傳染性疾病，廣泛發生于世界各地，對人類和養禽業危害很大(殷震、劉景華，1997.動物病毒學.北京.科學出版社)。

雞傳染性法氏囊病(Infectious?bursal?disease?virus，IBD)是由雙RNA病毒科中的傳染性法氏囊病病毒引起的一種特殊疾病，損害幼雞法氏囊。特征是腹瀉、衰竭，法氏囊先發生顯著炎癥和增大，繼之以萎縮，最后患雞死亡。本病除造成一些雛雞死亡外，還常引起病愈雞免疫抑制，導致免疫接種失敗，增加雛雞對雞新城疫等許多疾病的易感性(殷震、劉景華，1997.動物病毒學.北京.科學出版社)。

本發明人在已有的“雞新城疫滅活疫苗”和“傳染性法氏囊病基因工程亞單位疫苗”、“雞新城疫-傳染性法氏囊病二聯苗”、“雞新城疫-禽流感(H9亞型)二聯苗”等產品的基礎上，開展雞新城疫、禽流感(H9亞型)、傳染性法氏囊病三聯滅活疫苗研究。

發明內容

本發明的目的是制備雞新城疫、禽流感(H9亞型)、傳染性法氏囊病的三種抗原，并進行合理配比制成雞新城疫、禽流感(H9亞型)、傳染性法氏囊病三種疫病的三聯油乳劑疫苗(本發明又簡稱“三聯苗”)，可以有效預防雞新城疫、禽流感(H9亞型)、傳染性法氏囊病的發生，同時也可以大大減少人們的勞動強度，降低養禽業養殖戶的風險，而且保證了公眾健康。

本發明涉及的三聯苗技術的主要相關內容和所采用的技術手段：

(1)選育的新毒株經過血清學、分子生物學等試驗進行大量的臨床病料分析鑒定工作，最后選出HA效價高、免疫原性好并能抵御H9亞型各地方流行毒攻擊的一株較理想的制苗用毒株。

(2)在傳統全病毒滅活疫苗的基礎上結合基因工程亞單位疫苗的復配，并且保證各單一病毒在聯苗中均有和單苗一樣的效果。

(3)利用美國進口的Millipore濃縮機將抗原經過超強濃縮，抗體產生快，效價高，保護期長，降低疫病的發生及蔓延。(濃縮機的生產廠家，美國密理博。型號為CUP50)。

(4)疫苗制備主要步驟為：

1)生產用菌毒種為La?Sota株雞新城疫病毒、YBF003株禽流感病毒(H9亞型)和E.coliBL21/pET28a-VP2株表達IBDV?VP2蛋白的大腸桿菌基因工程菌；

2)分別按常規方法用雞胚繁殖La?Sota株雞新城疫病毒和YBF003株禽流感病毒H9亞型，收獲病毒液后經濃縮和滅活工藝制備成滅活病毒液；用加卡那霉素的LB液體培養基培養表達IBDV?VP2蛋白的大腸桿菌基因工程菌E.coli?BL21/pET28a-VP2株(本發明或簡稱為“基因工程菌”)，經過破菌、硫酸銨提取和滅菌工藝制備成表達的傳染性法氏囊病毒VP2蛋白；

3)將以上制備的三種滅活抗原混合后按常規方法制備滅活佐劑疫苗。

本發明的詳細描述

1.生產用種毒的來源

(1)雞新城疫病毒La?Sota株、效檢用雞新城疫強毒北京株(CVCC?AV1611株)均購于北京市海淀區中關村南大街8號中國獸醫藥品監察所；

(2)表達IBDV?VP2蛋白的大腸桿菌基因工程菌E.coli?BL21/pET28a-VP2株(中國典型培養物保藏中心(CCTCC)保管，菌株保藏編號為M204038，長江大學榮俊等提供，榮俊.IBDVVP2基因重組質粒Pbv220表達條件的優化?！秳游镝t學進展》2007年第4期；榮俊.傳染性法氏囊病重組亞單位疫苗免疫效力及安全性試驗.《浙江農業科學》2007年第6期)；傳染性法氏囊病病毒BC6-85株(CVCC?AV7株)購于北京市海淀區中關村南大街8號中國獸醫藥品監察所；