[發明專利]重金屬脅迫下水稻總蛋白的雙向凝膠電泳分離方法有效
| 申請號： | 201010611437.0 | 申請日： | 2010-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN102174069A | 公開（公告）日： | 2011-09-07 |
| 發明（設計）人： | 王飛娟;朱誠 | 申請（專利權）人： | 中國計量學院 |
| 主分類號： | C07K1/26 | 分類號： | C07K1/26;C07K14/415 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 310018 浙江省*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重金屬 脅迫 水稻 蛋白 雙向 凝膠電泳 分離 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種重金屬脅迫下水稻總蛋白的分離方法，包括：
(a)提取水稻根蛋白粗品，用乙醚和乙醇的混合溶液洗滌，冷凍干燥后溶于裂解液，水浴加熱0.5～2小時，離心，取上清液用丙酮沉淀，離心分離沉淀，冷凍干燥；
(b)將沉淀溶于增溶液中，用6～8倍體積的冷丙酮于-20～-15℃沉淀，離心分離沉淀，重復該步驟2～4次后，將沉淀冷凍干燥；
(c)將步驟(b)獲得的沉淀溶于增溶液中，利用雙向凝膠電泳分離。
2.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述的乙醚和乙醇的體積比為0.5～2。
3.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述的步驟(a)洗滌次數為2～4次。
4.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述的水浴加熱溫度為36～37℃。
5.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述的裂解液配方為：
5～7M尿素，1～3M硫脲，3～4％CHAPS，1％Pharmalyte?pH3-10，3～5％PVP，35mM?Tris，1～2％2-ME。
6.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述的增溶液配方為：
3～4％CHAPS，1％Pharmalyte?pH3-10，0.5～1.5％DTT。
7.根據權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述的雙向凝膠電泳所用膠條長度為18cm，pH為4～7。
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