[發明專利]一株來自植物窩兒七的內生真菌白地霉及其應用

有效

• 申請號: 201010609545.4
• 申請日: 2010-12-28
• 公開（公告）號: CN102168021A
• 公開（公告）日: 2011-08-31
• 發明（設計）人: 趙長琦;朱妍妍;張嘉;張正旺
• 申請（專利權）人: 北京師范大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/60
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一株來自植物窩兒七的內生真菌白地霉及其應用。

背景技術

鬼臼毒素(podophyllotoxin)主要存在于小檗科鬼臼屬及其近緣植物中，是一類具有廣泛生物學活性的天然化合物，有擬雌激素樣、抗雌激素樣、抗癌、抗病毒、抗真菌、鎮靜、抑制植物生長和抗氧化等作用。鬼臼毒素具有較強的抗癌活性，其作用機制是抑制微管蛋白的解聚作用以阻止細胞分裂以及抑制DNA拓撲異構酶的活性。鬼臼毒素的糖苷衍生物etoposide和teniposide的毒性較低，對小細胞肺癌、淋巴癌等多種腫瘤疾病均具有很好的療效，從而成為臨床應用的廣譜抗腫瘤藥物。

目前，鬼臼毒素主要是從野生鬼臼類植物的根莖中提取得到，而這類植物在全世界僅有4屬15種，我國有3屬12種，主要生長在秦嶺、西藏等高海拔地區，其生長緩慢，且鬼臼毒素類物質的含量較低。

由于鬼臼毒素類物質在醫學和農林防治等方面具有廣闊的應用前景，因而其需求量日益增加。對野生鬼臼類植物資源的大量采集，已使其資源遭到嚴重破壞，造成生物多樣性和生態環境的不可逆的損失。因此解決鬼臼毒素類物質的來源問題具有重要意義。

由于植物生長環境復雜，難以模擬，且其生長周期長，很難進行大規模的人工栽培，而組織培養技術對于鬼臼類植物也不適用。加之，鬼臼毒素類物質化學結構復雜，化學合成雖可進行，但成本太高。而通過基因工程學手段構建工程菌也由于參與形成該類物質的酶數量過多而無法進行。所以利用內生菌具有產生和宿主相同或相似的生物活性物質的性質，來解決鬼臼毒素的來源問題，可能是唯一也是最有效的方法。

近年來，已有學者利用內生菌具有產生和宿主相同或相似的生物活性物質的性質，對我國特有的一些鬼臼類植物的內生菌進行了研究，已有從川八角蓮、中華山荷葉中分離到青霉屬的內生菌，其培養物經層析分析具有與鬼臼毒素相同的Rf值的報道(中華山荷葉內生真菌的分離及其發酵產生藥用成分的初步研究，劉仕平、曾松茸、郭仕平、楊春艷、張玲琪，中國藥物與臨床，2003.3(3)：227-228；川八角蓮內生真菌產鬼臼毒素類似物的初步研究，郭仕平、蔣斌、蘇瑩珍、劉仕平、張玲琪，生物技術，2004.14(2)：55-56.)。

發明內容

本發明的目的是提供一株來自植物窩兒七的內生真菌白地霉及其應用。

本發明提供的白地霉(Geotrichum?candidum)，命名為WEQC，分離自陜西省眉縣紅河谷(海拔1560m)采集的植物窩兒七(Diphyllria?sinensis?L.)的根及根狀莖，已于2010年04月27日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址為：北京市朝陽區北辰西路1號院3號)，菌種保藏號為CGMCC?No.3783。白地霉(Geotrichum?candidum)WEQC?CGMCC?No.3783簡稱白地霉WEQC。

白地霉WEQC可用于制備鬼臼毒素葡萄糖苷和/或表鬼臼毒素雙葡萄糖苷。

本發明還保護一種制備鬼臼毒素葡萄糖苷和/或表鬼臼毒素雙葡萄糖苷的方法，是發酵培養白地霉WEQC，得到鬼臼毒素葡萄糖苷和/或表鬼臼毒素雙葡萄糖苷。

所述發酵培養的培養基可為馬鈴薯葡萄糖培養基。

所述發酵培養的條件可為：26-30℃、100-150rpm振蕩培養5-9天。所述發酵培養的條件具體可為：28℃、120rpm振蕩培養7天。

所述方法還可包括將發酵液進行萃取的步驟。所述萃取的萃取劑具體可為氯仿。

表鬼臼毒素雙葡萄糖苷(Picropodophillotoxin7’-O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside)的結構式如式1所示。

鬼臼毒素葡萄糖苷(Podophyllotoxin?7′-O-β-D-glucopyranoside)的結構式如式2所示。

式1????????????式2

本發明的白地霉WEQC具有產生鬼臼毒素葡萄糖苷以及表鬼臼毒素雙葡萄糖苷的生理特性，可用于鬼臼毒素類物質的制備。本發明提供的制備鬼臼毒素葡萄糖苷以及表鬼臼毒素雙葡萄糖苷的方法，發酵條件簡單、菌種易培養、生產周期短，具有工業化規模生產的應用潛力。本發明為鬼臼毒素類物質的資源開發提供了新途徑，對保護植物生態多樣性具有重要意義。

附圖說明

圖1為白地霉的菌落形態。

圖2為白地霉菌絲和節孢子的形態。

圖3為鬼臼毒素葡萄糖苷標準品的HPLC譜圖。

圖4為表鬼臼毒素雙葡萄糖苷標準品的HPLC譜圖。